药典微生物检验变化总结.ppt

2015版药典微生物检验变化总结 内容提要 2015年版微生物学检验中的重大修订 1、实验环境的重大修订 ①无菌检查环境洁净度规定 ②微生物限度检查环境洁净度规定 2、培养系统的重大修订 ①无菌检查中培养基的修订 ②微生物计数法中培养基的修订 ③控制菌检查法中培养基的修订 ④抑菌效力测定法中培养基的修订 ⑤纯化水及注射用水检查的修订 3、方法学验证方面的修订 4、对一、二、三部微生物学附录的整合、修订 一、实验环境的重大修订 2010年版 2015年版 无菌检查： 应在洁净度10000级背景下的局部100级单向流空气区域内或隔离系统中进行。 无菌检查： 应在洁净度B级背景下的局部A级单向流空气区域内或隔离系统中进行。 微生物限度检查： 应在洁净度10000级背景下的局部100级单向流空气区域内进行。 微生物限度检查： 应在受控洁净环境下（不低于D级）的局部不低于B级单向流空气区域内进行。 按实验性质修订微生物学检验环境洁净度 二、培养系统的重大修订 1. 无菌检查法 变更内容 1.1无菌检查方面，使用胰酪胨大豆肉汤（胰酪胨大豆液体培养基/大豆酪蛋白肉汤培养基）取代改良马丁培养基与硫乙醇酸盐流体培养基配合进行细菌和真菌的全面微生物检测。 1.2菌液制备环节，使用胰酪胨大豆肉汤、胰酪胨大豆琼脂取代营养肉汤、营养琼脂进行金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌和大肠埃希氏菌的菌液制备。 1.3菌液制备环节，使用沙氏葡萄糖液体培养基、沙氏葡萄糖琼脂培养基取代改良马丁培养基、改良马丁琼脂进行白色念珠菌和黑曲霉菌液的制备，同时对沙氏葡萄糖液体培养基、沙氏葡萄糖琼脂的配方进行了变更（动物组织胃蛋白酶水解物和胰酪胨等量混合物替代蛋白胨） 1.4适用性试验中，胰酪胨大豆肉汤使用枯草芽孢杆菌、白色念珠菌和黑曲霉进行灵敏度检查；硫乙醇酸盐流体培养基使用金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌、生孢梭菌、铜绿假单胞菌进行灵敏度检查。 二、培养系统的重大修订 1. 无菌检查法 1.5胰酪胨大豆肉汤支持广泛微生物的生长，包括需氧菌、兼性厌氧菌、真菌（主要是需氧菌和真菌）； 改良马丁培养基主要用于培养真菌； 硫乙醇酸盐流体培养基培养需氧、厌氧和微需氧微生物（是厌氧菌的首选培养基）。 二、培养系统的重大修订 2. 非无菌产品微生物限度检查 变更内容 2.1 供试品制备环节，除了pH7.0氯化钠—蛋白胨缓冲液、pH6.8磷酸盐缓冲液、pH7.6磷酸盐缓冲液外，添加了pH7.2磷酸盐缓冲液和胰酪胨大豆肉汤。 2.2菌液制备环节，使用胰酪胨大豆肉汤、胰酪胨大豆琼脂取代营养肉汤、营养琼脂进行金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、乙型副伤寒沙门氏菌和大肠埃希氏菌的菌液制备；使用沙氏葡萄糖液体培养基、沙氏葡萄糖琼脂培养基取代改良马丁培养基、改良马丁琼脂进行白色念珠菌和黑曲霉菌液的制备，同时对沙氏葡萄糖液体培养基、沙氏葡萄糖琼脂的配方进行了变更（动物组织胃蛋白酶水解物和胰酪胨等量混合物替代蛋白胨）；使用梭菌增菌培养基取代硫乙醇酸盐流体培养基进行生孢梭菌菌液的制备。 二、培养系统的重大修订 2. 非无菌产品微生物限度检查 2.3 微生物计数环节，使用胰酪胨大豆琼脂取代营养琼脂进行需氧菌计数；增加需氧菌的MPN法计数，该方法使用胰酪胨大豆肉汤；使用沙氏葡萄糖琼脂取代玫瑰红钠琼脂进行霉菌和酵母菌总数测定，同时增加玫瑰红钠琼脂、沙氏葡萄糖琼脂(含抗生素)两种选择性培养基于对因沙氏葡萄糖琼脂上生长的细菌使霉菌和酵母菌的计数结果不符合微生物限度要求情况下的霉菌和酵母菌计数；取消了使用酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基(YPD)对酵母菌进行计数的试验环节。 2.4适用性试验中，胰酪胨大豆琼脂培养基使用金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌和黑曲霉进行适用性检查（铜绿代替大肠更有挑战性，铜绿生长时会产生类似表面活性剂的一些抑制成分）；沙氏葡萄糖琼脂培养基使用白色念珠菌和黑曲霉进行适用性检查检查。 二、培养系统的重大修订 2. 非无菌产品微生物限度检查 2.5 TSA培养基含有动物来源和植物来源的蛋白胨，营养丰富，对某些较难生长的细菌均能生长，对酵母菌、霉菌也均能生长，而营养琼脂培养基其实就是一种无选择性的较低营养成分的固体培养基，主要用于细菌菌落计数； 2.6 SDA培养基：培养真菌和酵母菌，抑制细菌生长，玫瑰红钠琼脂培养基具有抑制细菌生长，并可减缓霉菌生长过快而导致菌落蔓延生长，具有专属性。（SDA代替玫瑰因为玫瑰其实是选择性培养基，没有SDA那么有广谱性） 同时：20