氟苯尼考与多西环素合用对鸡大肠杆菌的抑菌试验.docVIP

氟苯尼考与多西环素合用对鸡大肠杆菌的抑菌试验 　　[中图分类号] S858 [文献标识码] A [文章编号] 1003-1650 （2015）10-0167-02 中国论文网 /8/view-7174811.htm 　　前言：近年来，随着养鸡业的迅猛发展，鸡大肠杆菌病的发病率和死亡率也不断增加，现已成为危害养殖业的最为危害之一。 目前细菌性疾病的防治主要依靠抗菌素和疫苗制品，但由于细菌血清型差异变化较大、抗菌素长期超大剂量使用、耐药菌株产生等原因，导致细菌性疾病的防治效果下降，因而在临床上需不断选取敏感性药物才能达到防治细菌性疾病的目的增多腹膜，有灰白色渗出物。目前大肠杆菌对抗生素容易产生耐药性，氟苯尼考与多西环素连用对鸡大肠杆菌进行体外抑菌试验观察其，联合应用的抑菌效果，为临床应用提供了依据。 　　1 方法 　　1.1 细菌分离 　　无菌采集死鸡的肝脏，肺脏等组织。接种到普通琼脂平板上在温箱中37℃培养20h。涂片革兰氏染色后镜检。挑取表面光滑，边缘整齐，灰白色半透明的单个小菌落划线接种于麦康凯琼脂平板，于37？℃培养20？h。 　　1.2 生化试验 　　将纯培养物分别接种到葡萄糖、乳糖、麦芽糖等生化试验管内37℃培养20h种到普通肉汤当中放进温箱37？℃培养20h，涂片，用革兰氏染色后镜检，挑观察结果 　　1.3 菌液制备 　　将分离出来菌钓取单个菌落接种到营养肉汤中，37℃培养20h放到4℃冰箱保存备用。 　　1.4 药敏试验 　　1.4.1用天枰称取0.07g氟苯尼考原粉放入小玻璃瓶中用无菌蒸馏水稀释后放入滤纸片并浸湿。贴上标签放入恒温箱留作配用。 　　1.4.2称取0.07g多西环素原粉放入小玻璃瓶中用无菌蒸馏水稀释后放入滤纸片并浸湿。贴上标签放入恒温箱留作配用。 　　1.4.3称取氟苯尼考多西环素各0.07g放入小玻璃瓶中用无菌蒸馏水混匀稀释后放入滤纸片并浸湿。贴上标签放入恒温箱留作配用。 　　1.4.4将培养皿清洗干净用牛皮纸包好放在高压灭菌锅里灭菌15min，取出后放入干燥箱内干燥，放入恒温箱备用。 　　1.4.5制作营养琼脂平板： 称取蛋白胨10g、牛肉膏5g、Nacl 5g、琼脂15g、500ml的蒸馏水放入烧杯中，放入微波炉里直至溶解，取出牛皮纸封口用绳扎紧放在高压锅内灭菌15min。灭菌后取出将琼脂倒入培养皿中，轻轻摇动使其均匀，琼脂凝固后涂病料。 　　1.4.6接种： 取出接种环烧去多余菌体，待接种环冷去挑取鸡大肠杆菌的单个菌落稍稍打开培养皿从接种细菌的部位从左向右轻轻划线，划线完毕皿盖。在已接完种的平板底壁中心及四周贴上标签写上药物名称，在用镊子夹取制备好的药片贴在琼脂平板的上与所写药名的位置对应，最后放入恒温箱中20h后观察. 　　药敏判定标准：抑菌圈直劲， 15 mm≤d20 mm为高敏， 10 mm≤d15 mm为中敏， d10 mm为低敏。 　　2 最小抑菌浓度测定 　　2.1 氟苯尼考体外抑菌 　　2.1.1 药物原液稀释 　　用电子天平称取0.07g药物，用无水乙醇滴加震荡至完全溶解，以蒸馏水容到50ml，无菌操作将药物溶解稀释1280ug/ml。 　　2.1.2 稀释菌液 　　用营养肉汤做1：100倍稀释，然后在8支无菌加塞试管中加入稀释后的菌液，在第一个管中加入稀释后的菌液1.8ml其余各管均加入1ml。 　　2.1.3 加入抗菌药物 　　做2倍递进稀释，将灭菌后的试管放在试管架上进行试验操作，在第一试管内加入抗菌药物原液0.2ml，混合后用移液管吸出1ml加入第2个试管中，用同样的方法依次稀释至第7个试管中弃去1ml。第8管为生长对照37℃培养箱中培养18小时后观察结果凡无肉眼可见的细菌生长的最低药液浓度为该药单用时的MIC。 　　2.2 多西环素体外抑菌 　　2.2.1 药物原液稀释 　　用电子天平称取0.08g药物，用无水乙醇滴加震荡至完全溶解，以蒸馏水容到50ml，无菌操作将药物溶解稀释1280ug/ml。 　　2.2.2 稀释菌液 　　用营养肉汤做1：100倍稀释，然后在8支无菌加塞试管中加入稀释后的菌液，在第一个管中加入稀释后的菌液1.8ml其余各管均加入1ml。 　　2.2.3 加入抗菌药物 　　做2倍递进稀释，将灭菌后的试管放在试管架上进行试验操作，在第一试管内加入抗菌药物原液0.2ml，混合后用移液管吸出1ml加入第2个试管中，用同样的方法依次稀释至第7个试管中弃去1ml。第8管为生长对照37℃培养箱中培养18小时后观察结果凡无肉眼可见的细菌生长的最低药液浓度为该药单用时的MIC。 　　2.3 联合用药 　　2.3.1 药物原液稀释 　　分别称取两种药物原粉，用蒸馏水混合定容到50ml。 　　2.