组织培养技术精要.ppt

细胞培养技术 一、组织培养的基本概念 Tissue culture: 从体内取出组织摹拟体内的生理环境，在无菌、适当温度、和一定营养条件下，使之生存和生长并维持其结构和功能的方法。 体外培养 细胞培养 培养物是单个细胞或细胞群。细胞在培养时都要生活在人工环境中，由于环境的改变，细胞的移动或受一些其他因素的影响，培养时间加长，传代导致细胞出现单一化型。 器官培养 器官培养：与组织培养条件相似，培养的是器官的原基，器官的一部分或整个器官，以便能够在体外生存、生长和保持一定功能的方法。 细胞培养目的与用途 1、科学研究：药物研究开发与基础研究 (1) 新药筛选：(2) 疫苗研究与开发： (3) 基因工程药物研究与开发： (4) 细胞工程药物研究与开发： (5) 单克隆抗体制备： (6) 药物作用机理(6) 基因功能(7) 疾病发生机理 2、 生物制药 (1) 疫苗生产： (2) 基因工程药物生产： (3) 诊断用和药用单克隆抗体生产 (4) 细胞工程药物生产： 对组织培养的评价 优点：1、直接观察活细胞的形态结构和生命活动。2、便于用各种不同技术方法研究细胞。3、培养细胞携带有与体内细胞同等的基因组，广泛用于分子生物学和基因工程研究。4、同时提供大量的生物学性状相似的实验对象。 不足：利用培养细胞做实验对象时，不应视为与体内细胞一样。 组织培养的发展简史 1、早期组织培养: Roux（1885） 用温NS培养鸡胚。Jolly(1903)用盖片悬滴法培养蝾螈白细胞。Beebe and Ewing(1906)培养狗淋巴细胞。 2、现代组织培养：Harrison(1907) and Carrel(1912)开始， Harrison培养蛙胚神经组织。 Carrel培养了鸡胚心肌组织。 3 从50年代起，组织培养技术快速发展。试管培养 组织培养细胞生物学 一、体内外细胞的差异 “反祖”（Atavism)现象：细胞失去原有组织结构和细胞形态、分化减弱或不显；表现为细胞趋于单一化，或获得永生性，或变成具有恶性性状的细胞群。 二、培养细胞的分化 1、不适应（deadaption) 细胞在原体内时所拥有的分化特征减弱或不显。（培养的肝细胞酪氨酸转移酶特性丧失）。生存条件改变使分化阻抑。 2、脱分化或去分化（Dedifferentiation): 细胞失掉发生分化的能力（培养的肝细胞失掉产生精氨酸酶、氨基转移酶等特性后，则失去储存肝糖原能力）。是基因突变所致 培养细胞在体外生存时间与其分化能力呈反向关系。 细胞分化的关键在于是否存在有诱导细胞发生分化的因子。 培养细胞的形态分类根据是否附于支持物上生长的特性，分为:  贴附型 悬浮型 （一）贴附型 细胞贴附在支持物表面生长，只依赖贴附才能生长的细胞叫做贴附型细胞(Anchorrage-dependent cells)这种现象与细胞分化有关。 贴附型细胞的分型 1.成纤维型细胞：(fibroblast) 来自中胚层 特点：与体内成纤维细胞形态相似,胞体梭型或不规则三角形,中央有圆形核,胞质向外伸出2～3个长短不同的突起。 细胞在生长时呈 放射状,漩涡或火焰状走行。 起源：细胞来自中胚层间充质组织。 除真正的成纤维细胞、心肌、平滑肌、成骨细胞血管内皮细胞。 注意：细胞在培养时成为成纤维型细胞是一种惯称,与体内细胞不同。 2.上皮型细胞(epithlium cell type) 来自外胚层 特点：扁平不规则多角型、圆形核、细胞紧密相连成细胞增殖数目增多时,整个上皮膜随之移动。边缘细胞很少脱离细胞群而单独活动“ 拉网”现象与起源内外胚层组织有关。 组织: 皮肤表皮及其衍生物(汗腺、皮脂腺)消化道分上皮、肝、胰、肺泡上皮。 3. 游走型细胞(wandering cell type) 特点：在支持物上散在生长,不连接成片,胞质伸出伪足或突起呈活跃的游走或变形运动,速度快不规则, 密度大连接成片呈多角形不易与其他类型的细胞 区别。 4. 多形型细胞 (polymorphic cell type) 特点： 无规律的形态，如神经细胞。 悬浮型细胞(suspended cell type) 特点： 不贴附在支持物生长，胞体圆形，在培养液中生长空间大，可长时间的生长，繁殖旺盛便于做细胞代谢研究。S180肉瘤、血液里的白细胞、K562、 HL－60。 分型的目的： 方便描述细胞在培养过程中的形态变化。培养条件好时，细胞相对稳定，可反映出起源、正常异常的区别，作为判定细胞生物学性状指标。 强调：一般形态并不是一项可靠指标要受各