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平板色谱法 第一节 薄层色谱法 分离过程,原理,特点 影响Rf的因素 4 操作技术 第一节、纸色层 上行法 　　将点有试样的滤纸条的下端浸入溶剂（但不能浸没点样处）上端固定在层析缸的上部，保持垂直，将缸密闭，使溶剂沿下端上升而展层。待溶液上升到距离纸上端3 ~ 4 cm 时，将滤纸取出，用铅笔在溶剂前沿处画线作记号（见右图） 对于 Rf 十分接近的物质可采取连续挥发的色谱法 纸条的上端暴露在层析缸外，以便令上升的溶剂挥发； b. 只要保持纸条下端与溶剂面接触，溶剂便能不断地上升而挥发，展层过程就自动连续地进行； c. 若溶剂沸点＞100oC，则可在纸条暴露部分用红外灯烘烤，促使溶剂挥发； d. 该法不能测量前沿，但可达分离的目的。 下行法 溶剂自纸的上端向下降（借助于重力的作用），具有分离速度快及连续挥发色谱的优点。 　　 玻片 玻璃棒 原点 玻皿 剪成锯齿状，便于溶剂滴下 涂布液 取一定量的吸附剂放入研钵中，加入需要的水或适当的溶剂，研磨时间以调成稀糊状为度，当浓度均一后，即成胶状物，色泽洁白为最佳，立即倾入玻璃板上，用下述方法涂布。 涂布方法 玻棒涂布： 玻片刮涂 倾斜涂布（利用流平性）-简，但均匀性差 涂布器 活化 薄板首先风干，否则湿板一下加热到高温，烘出的薄板很酥松，使用效果不好。 氧化铝G板在150 ~ 160oC, 烘4小时(Ⅱ级左右) 硅胶G板在110oC烘1小时 薄板经活化后，一定要储藏在密闭的干燥器或烘箱中备用。 (2)点样 　　适当的点样量，集中的斑点是得到一个好的色谱的必要条件。如何才适当？不同的分离要求、不同的薄板（有厚有薄）、不同的吸附剂（性能不一），需要不同的点样量。从下图可见：点样量少了，不易检出；点样量多了，易拖尾或扩散，影响分离效果。 0.1 2 50 300 0.5 0.3 0.1 Rf ?g 　　纯物质的鉴定，若又有高灵敏度的显色剂，点样量只需?g或ng；若进行天然物或中间产物的分离时，点样量需50 ?g~几百微克；若进行制备色谱，进样量可达1mg。点样时可用内径约1mm，管口平整的毛细管或微量吸管吸取试液后，轻轻接触板面，分数次滴加样品。 注意点： a.溶解试样的溶剂最好是挥发性的 b.点样宜分几次点加,即点一次后, 用吹风机的冷风吹干, 再点, 再吹干, ......., 反复,直到点完所要求的量 c. 点样量的体积尽可能小些(2 ~ 10?L左右) d. 点样最好是在密闭的室中或比较干燥的环境下完成, 避免薄板吸水降低活性. 15cm 2.5cm 1.5cm 溶剂前沿 （３）展层 　　薄层的展开需在密闭的器皿中进行，密闭容器应用展开溶剂予先饱和。展开方式和纸层析相同。但不加粘合剂的薄板只能作近水平式（与平面成20 ~ 10oC角）的上行或下行的展层而不能垂直展层。 把点好样品的薄板浸入0.5cm深的适宜展开剂中，当展开剂移动至离起点约10 ~ 20cm处(约30min)，将薄板取出放平，用铅笔或小针记下溶剂前沿的位置后，在室温干燥或烘箱内干燥，测其Rf值。 注意：每次的展层距离要固定，以便Rf值的重复 （４）检出 a.本身是有色物，可以直接观测斑点的位置和颜色 b.本身无色但在紫外线的照射下会发出不同颜色的荧光 c.薄板本身有荧光（硅胶HF254+366, 硅胶GF254, ......), 欲测物吸收紫外线, 在荧光背景下呈暗色 d.多数有机物, 喷10 ~ 50% H2SO4(或铬硫酸)并在100 ~ 120oC加热, 使有机物碳化, 观察加热中有机物颜色变化及碳化斑点位置, 可以推断物质的化学性质 e. 喷显色剂或荧光试剂（不含粘合剂的薄板不能喷，只能浸，以免把吸附剂吹散） 表 主要显色试剂 生物碱 1g I2 +10gKI溶于50mLH2O中，加入2mLHAc，稀释至100mL，喷雾 I2-KI 全部有机物 喷雾，紫外线照射 2’,7’-二氯荧光黄(0.2%乙醇) 全部有机物 5g K2Cr2O7+100mL H2SO4, 喷雾,　280oC观察颜色变化 H2SO4-K2Cr2O7 高级醇、醛、酮、甾体 喷雾, 100 ~120oC ?, 观察颜色变化 浓H2SO4 检出范围 配制及使用方法 试剂 检出范围 配制及使用方法 试剂 脂肪、甾类、类脂、三萜酸、生物碱 5g溶于100mL95%乙醇 磷钼酸 酚羟基、鞣质、黄酮 1g溶于100mL FeCl3 胺类（如麻黄碱、氨基酸等） 0.5%丙酮溶液 茚三酮 还原性物质、醛、还原糖 2.6gAgNO3溶于50mL水，加入NH3H2O至沉