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细胞生物学实验论文 外来化合物对细胞生理代谢的影响 —急性ZnCl2染毒对小麦幼苗茎叶组织SOD活力的影响 指导教师：张小民 李翠兰 学院： 生命科学 专业： 生物科学 姓名： 王兴通 学号： 2011312029 摘要：本实验以急性ZnCl2和小麦幼苗为实验材料，研究了不同浓度(ZnCl2的浓度分别是100mg/mL、200mg/mL、400mg/mL、800mg/mL、1600mg/mL)对小麦幼苗生理活性的影响，初步阐明了Zn+2对小麦幼苗的毒害机理。结果表明，结果以浓度400 mg/mL处理最佳,能够显著促进小麦根系的生长,根长、根重和根系活力分别比对照显著提高。在Zn+2胁迫下，随处理浓度的升高，小麦幼苗叶片中超氧化物歧化酶(SOD)活性呈上下波动的趋势。通过对各组SOD值的分析可知，浓度小于100mg/L的Zn+2促进SOD同工酶的表达，浓度大于800mg/L的Zn+2抑制SOD同工酶的表达，中间浓度呈波动性影响， 低浓度的ZnCl2可诱导小麦幼苗SOD的表达，而高浓度的ZnCl2会抑制SOD的活性。 关键词：外来化合物； ZnCl2； 小麦幼苗组织； SOD酶活性 1.材料与方法 1.1实验材料 1.1.1材料：小麦幼苗:实验室固体培养基中培养 1.1.2试剂：0.05mol/l PBS缓冲液（PH7.0） SOD试剂盒 冰醋酸 5个不同浓度ZnCl2溶液（100mg/l 200mg/l 400mg/l 800mg/l 1600mg/l） 1.1.3器材：离心机 分光光度计 天平 恒温水浴锅 冰浴 微量移液器（100ul 50ul） 研钵 离心管 一次性塑料管 1.2实验方法 1.2.1 ZnCl2染毒处理实验及粗酶提取液的制备 浸种5-6 h，萌发24-36h后将露白的种子随机摆放于培养皿中，30-40粒/皿左右，生长7天后，分别用不同浓度的ZnCl2溶液处理9天后，取茎叶0.2-0.3g，按1:20加入遇冷的PBS液（1/3用于研磨，2/3用于清洗，小范围研磨，便于冲洗），冰浴研磨，倒入离心管，并用剩余的PBS液冲洗入离心管。8000rpm离心15min，上清液即为5%的粗酶提取液，用于SOD酶活性的测定。 1.2.2总SOD酶活力测定（按下表进行） 试剂 测定管（4个） 对照管（1个） SOD试剂1 1ml 1ml 粗酶提取液 40ul -- 蒸馏水 -- 40ul SOD试剂2 0.1ml 0.1ml SOD试剂3 0.1ml 0.1ml SOD试剂4 0.1ml 0.1ml 充分摇匀，置37℃水浴40min 显色剂 2ml 2ml 混匀，室温放置10min，于波长550nm处，1cm光径比色杯，蒸馏水调零，比色，测定各管OD值。 2.结果与分析 注：1%的粗酶提取液稀释倍数为100倍/g 2.1不同浓度Zncl2溶液处理小麦茎叶总SOD酶活性 Zncl2浓度（mg/L） 各重复的总SOD酶活力 总SOD平均值±标准差 1 2 3 4 0（对照） 1938 2250 2141 2216 2136.2500±139.79121 200 2110 2442 1906 1914 2093.0000±251.06440 400 3088 3094 2643 3228 3013.2500±255.15404 800 2109 3133 2631 2877 2687.5000±436.74363 1600 1966 2254 2619 2558 2349.2500±301.27216 由表可知，当Zncl2浓度为200mg/L时，与对照组相比，SOD酶的活性增加，当Zncl2浓度为400mg/L,800mg/L和1600mg/L时，与对照组相比，SOD酶的活性减小。 2.2不同浓度Zncl2溶液处理组之间SOD酶活的t-检验P值 P 0mg/L 200mg/L 400mg/L 800mg/L 200 1.000 — — — 400 0.007 * * 0.005* * — — 800 0.178 0.117 1.000 — 1600 1.