ChapterPropertiesofEnzymes(part)重点分析.ppt

2. Transferases 3. Hydrolases 4. Lyases 5. Isomerases 6. Ligases (synthetases) 国际单位（IU）（1961年）： 在最适反应条件（25℃）下，每分钟内催化1μmol底物转化为产物所需要的酶的量为1个酶活力单位，即：1IU = 1μmol / min。 Katal（Kat）单位： 在最适条件下，每秒钟能催化1mol底物转化为产物所需的酶量为1 Kat单位（1Kat = 1mol / S）。 1Kat= 60×106 IU， 1IU = 16.7 nKat。 3．酶的比活力(specific activity)： 每mg蛋白质所含的酶活力。表示酶的纯度，也表示单位质量蛋白质的催化能力。 比活力 = U / mg蛋白 = 总活力U / 总蛋白mg 4．酶活力的测定方法： （1）分光光度法： （2）荧光法： （3）同位素测定法： （4）电化学法： （3）kcat/Km的意义：在生理条件下，大多数酶并不被底物所饱和，在体内[S]/Km的比值通常介于0.01-1.0之间。 Vmax=kcat[ET] 当[S] Km 时，[E]=[ET] v?(kcat/Km) · [E][S] kcat/Km = k1·k3/ (k2+k3) 上限为k1 kcat/Km表示酶的催化效率。 抑制程度的表示方法：一般用反应速率的变化来表示。不加抑制剂时的反应速率为v0，加入抑制剂后的反应速率为vi，则表示： （1）相对活力分数（残余活力分数）： a = vi / v0 （2）相对活力百分数（残余活力百分数）： a % = vi / v0 ×100% （3）抑制分数：指被抑制而失去活力的分数 i = 1－a = 1－vi / v0 （4）抑制百分数： i % = （1－a）×% = （1－vi / v0）×% 通常所谓抑制率是指抑制分数或抑制百分数。 专一性的不可逆抑制剂分为： （1）ks型：是根据底物的化学结构设计的，具有底物类似的结构，可以和相应的酶结合，同时还带有一个活泼的化学基团，能与酶分子中的必需基团反应进行化学修饰，从而抑制酶活性。也称为亲和标记试剂。 （2）kcat型：是根据酶催化过程设计的，设计此类抑制剂，要求对酶的作用机制预先有一定的了解。它不但具有天然底物的类似结构，且本身也是酶的底物，能与酶结合发生类似于底物的变化。但抑制剂还有一个潜在的反应基团，当酶对它进行催化反应时，这个潜在反应基团被暴露或活化，并作用于酶活性部位的必需基团或酶的辅基，使酶不可逆失活。它是专一性极高的不可能逆抑制剂，也称为自杀性底物。 3. Uncompetitive inhibition 某些抑制剂不能与游离的酶结合，而只能在酶与底物结合成复合物后再与酶结合。当酶分子上有了抑制剂后其催化功能被削弱。这种作用称为反竞争性抑制作用(uncompetitive inhibition)。 反竞争性抑制中， Vmax变小，Km变小， Summery Summary—— 抑制剂以共价键不可逆地与酶相结合而抑制酶的活性。这种抑制作用叫不可逆抑制作用。不可逆抑制剂不能用透析或超滤等方法去除。 包括：专一性的和非专一性的不可逆抑制剂 5.7 Irreversible enzyme inhibition 当[S] [E]时 [E] =[ES], 此时达到最大反应速率 即： Vmax = K3[ES]= K3[E] （7） 将（7）式代入（6）式 v=k3[ES] （5） v=k3[E][S] / Km ? [S] （6） V = Vmax·[ S ] Km + [ S ] Km—米氏常数，当酶反应速率达到最大反应速率一半时的底物浓度，单位：mol/L； Km= (k2+k3)/k1 Km 是酶的特征常数，近似表示酶与底物的亲和力。 （1）当[S] ? Km时，反应速率与底物浓度成正比，v与[S]的关系符合一级动力学。酶没有全部被底物所饱和。 （2）当[S] ? Km时，反应速率已达到最大速率，这时酶全部被底物所饱和，v与[S]无关，符合0级动力学，只有在此条件下才能正确测得酶活力。 （3）当[S] = Km 时，反应速率为最大速率的一半，因此Km就代表反应速率达到最大反应速率一半时的底物浓度。 Km = [S] Plots of initial velocity (vo) versus [S] At high [S] the reac