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金域检验维生素D检测项目说明书 第一部分、25羟基维生素D项目基本信息 一、标本要求 1、标本类型：静脉血，血清，需尽快分离 2、标本量：1ml，最少0.5ml 二、检测流程 1、吸取200ul血清+蛋白沉淀试剂+内标； 2、震荡后加入萃取溶剂，震荡萃取； 3、吸取上清液，氮气吹干； 4、定容100ul上机测试。 检测方法 检测方法介绍 高效液相色谱—串联质谱法：液相色谱质谱联用将色谱的分离能力与质谱的定性功能结合起来，实现了对复杂混合物更准确的定量和定性分析，简化了样品的前处理过程，使样品分析更简便。 方法学优势 采用液液萃取的前处理方法，最大程度的从血清中提取出待测物； 通过液相色谱法将待测物与杂质完全分离，进一步对待测物提纯、分离； 最后采用串联质谱法进行定性定量，有效保证结果的准确、可靠； 由于灵敏度高、特异性强、高通量，已成为医院规范化测量25(OH)D的“金标准”方法。 第二部分、实验室质量管理介绍 一、检测仪器 我司采用国际一流的美国AB公司的液相色谱串联质谱仪（API4000），进行血清25羟基维生素D的检测，从而准确、高效的检出体内维生素D营养水平。 实验员审批结果 API4000 仪器参数如下： 液相色谱部分四元梯度泵:?? 流量范围：0.001-10.0ml/min, 0.001 ml/min递增流量精度：≤0.15%RSD 压力范围：0-400bar梯度洗脱：0-100%，0.1%递增 梯度混合精度：±0.2%带在线四通道脱气装置自动进样器:? 可放置≥100个2 ml样品瓶进样量：0.1-100μl 进样精度：0.5%RSD二极管阵列检测器(1024个tube) 质谱部分包括ESI和APCI离子源(非复合源)电喷雾离子源（ESI）：流量1-2000μl/min(无需分流)大气压化学电离源（APCI）：流量50-3000μl/min(无需分流)离子源接口适用于100%有机相到100%水相三级四极杆串联型质量分析器质量范围 m/z：5-3000 分辨率：≤0.5amu质量数稳定性：≤0.1 amu/12h 定量范围：4*10 检测试剂 为了最大限度的保障该项目的检测质量，我们采用了美国SIGMA公司的标准品和内标品；采用德国RECIPE公司的质控品。 为了保障方法的准确度，我们采用了美国标准化委员会给出的用于核查25羟基维生素D检测方法准确度的标准物质SRM972。 三、 串联质谱检测质控 1、国际标准化质控：参加美国CDC举办的串联质谱质控，每年2-3次。 2010年美国CDC证书 2011年美国CDC证书 2、室内及室间质评：每年由美国CDC统一发放室内质控品，由实验室测定上报质控结果，并进行全球范围内统计分析。 3、通过美国NIST校准品检测和BIO-RAD质控品检测，确保结果的准确性。 4、每日每批次进行至少两个浓度质控测定，保证质量。 第四部分、25(OH) D检测报告 1、我中心报告参考值 儿童参考值范围： 5ng/mL 维生素D严重缺乏 5-15ng/mL 维生素D缺乏 16-20ng/mL 维生素D不足 20-100ng/mL 维生素D正常 100ng/mL 维生素D过量 成人参考范围： 20ng/mL 维生素D缺乏 20-30ng/mL 维生素D不足 30-100ng/mL 维生素D正常 100ng/mL 维生素D过量 ——中华医学会儿科学分会儿童保健组、《中华儿科杂志》编辑委员会：儿童微量营养素缺乏防治建议. 中华儿科杂志 2010年7月，第48卷，第7期. 2、报告单事例 报告单实例 25(OH) D、25(OH) D2、25(OH) D3三个值同时报告，准确评价人体???液中25(OH) D含量，有利于临床诊断病因、检测补充效果。 1-14岁儿童、14岁以上成人检测报告的分段参考值，为不同年龄段人群提供不同参考值。 一岁以下儿童检测结果受25OHD的C-3同分异构体的干扰，送检需谨慎。 金域检验 总部市场部