色谱分析法是分析化学中获得广泛应用的一个重要分支-仪器信息网.doc

第一章 绪 论 色谱分析法是分析化学中获得广泛应用的一个重要分支，从本世纪初俄国植物学家茨维特(M．S．Tswett)提出经典液相色谱法后，色谱分析法取得迅速发展，30~40年代发展了柱分配色谱、纸色谱；50年代发展了气相色谱法，薄层色谱法；60年代发展了凝胶色谱法及高效液相色谱法；70年代发展了高效毛细管气相色谱法；80年代发展了毛细管电泳和电色谱；90年代又出现了光色谱。 所有上述各种色谱技术的发展过程，都表明了色谱分析法是一个具有强大生命力的分离分析技术。 第一节 高效液相色谱法的特点 作为色谱分析法的一个分支，高效液相色谱法是在本世纪60年代末期，在经典液相色谱法和气相色谱法的基础上，发展起来的新型分离分析技术。液相色谱包括传统的柱色谱、薄层色谱和纸色谱。50年代后气相色谱法在色谱理论研究和实验技术上迅速崛起。而液相色谱技术仍停留在经典操作方式，其操作繁琐，分析时间冗长，因而未受到重视。60年代以后，随着气相色谱法对高沸点有机物分析局限性的逐渐显现，人们又重新认识到液相色谱法可弥补气相色谱法的不足之处。60年代末随色谱理论的发展，色谱工作者已认识到采用微粒固定相是提高柱效的重要途径，随着微粒固定相的研制成功，液相色谱仪制造商在借鉴了气相色谱仪研制经验的基础上，成功地制造了高压输液泵和高灵敏度检测器，从而使液相色谱法获得新生。 从分析原理上讲，高效液相色谱法和经典液相(柱)色谱法没有本质的差别，但由于它采用了新型高压输液泵、高灵敏度检测器和高效微粒固定相，而使经典的液相色谱法焕发出新的活力。经过近30年的发展，现在高效液相色谱法在分析速度、分离速度、分离效能、检测灵敏度和操作自动化方面，都达到了和气相色谱法相媲美的程度，并保持了经典液相色谱对样品适用范围广、可供选择的流动相种类多和便于用作制备色谱等优点。至今，高效液相色谱法已在生物工程、制药工业、食品工业、环境监测、石油化工等领域获得广泛的应用。 高效液相色谱(High Performance Liquid Chromatography)还可称为高压液相色谱(High Pressure Liquid Chromatography)、高速液相色谱(High Speed Liquid Chromatography)或现代液相色谱(Modern Liquid Chromatography)。 一、与经典液相(柱)色谱法比较 经典液相(柱)色谱法使用粗粒多孔固定相，装填在大口径、长玻璃柱管内，流动相仅靠重力流经色谱柱，溶质在固定相的传质、扩散速度缓慢，柱入口压力低，仅有低柱效，分析时间冗长。 高效液相色谱法使用了全多孔微粒固定相，装填在小口径，短不锈钢柱内，流动相通过高压输液泵进入高柱压的色谱柱，溶质在固定相的传质，扩散速度大大加快，从而在短的分析时间内获得高柱效和高分离能力。 经典液相(柱)色谱法和高效液相色谱法的比较可见表1-1。 表1-1 高效液相色谱法与经典液相(柱)色谱法的比较 方法 项目 高效液相色谱法 经典液相（柱）色谱法 色谱柱：柱长/cm 柱内径/mm 10～25 2～10 10～200 10～50 固定相粒度：粒径／μm 筛孔／目 5～50 2500～300 75～600 200～30 色谱柱入口压力／MPa 2～20 0.001～0.1 色谱柱柱效／(理论塔板数／m) 2×103～5×104 2～50 进样量／g 10-6～10-2 1～20 分析时间／h 0.05～1.0 1～20 二、与气相色谱法比较 高效液相色谱法与气相色谱法有许多相似之处。气相色谱法具有选择性高、分离效率高、灵敏度高，分析速度快的特点，但它仅适于分析蒸气压低、沸点低的样品，而不适用于分析高沸点有机物、高分子和热稳定性差的化合物以及生物活性物质，因而使其应用受到限制。在全部有机化合物中仅有20％的样品适用于气相色谱分析。高效液相色谱法却恰可弥补气相色谱法不足之处，可对80％的有机化合物进行分离和分析，此两种方法的比较可见表1-2。 表1-2 高效液相色谱法与气相色谱法的比较 方法 项目 高效液相色谱法 气相色谱法 进样方式 样品制成溶液 样品需加热气化或裂解 流动相 1、液体流动相可为离子型、弱极性、非极性溶液，可与被分析样品产生相互作用，并能改善分离的选择性。 2、液体流动相动力粘度为10-3Pa?s，输送流动相压力高达2~20Mpa。 1、气体流动相为惰性气体，不与被分析的样品发生相互作用。 2、气体流动相动力粘度为10-5Pa?s，输