人参皂苷Rg1和Rh1抗肿瘤作用及研究.docVIP

人参皂苷Rg1和Rh1抗肿瘤作用的研究 陈声武,王 岩,王 毅,王丽娟,何忠梅,王本祥 (吉林天药科技股份有限公司天然药物研究所,吉林长春130012) [基金项目] 国家自然科学基金资助课题 [作者简介] 陈声武(1958-),男,吉林省长春市人,副主任医师,在读医学博士,主要从事中药吸收入血有效成分及其生物活性的研究。 [摘 要] 目的:研究人参皂苷Rh1及其前体Rg1的整体及离体抗肿瘤作用。方法:整体实验4种小鼠移植性肿瘤:小鼠宫颈癌-14(U14)、艾氏腹水癌(EAC)、肉瘤-180(S180)和肝癌腹水型(HepA)腋部皮下接种,于接种10 d内,每天给药1次,计算各给药组肿瘤抑制率。离体抗肿瘤实验用3种瘤株: A375-S2、T98G和HeLa。结果:人参皂苷Rg1(200 mg·kg-1,灌胃)和Rh1(40和 20 mg·kg-1,腹腔注射)对U14均具有明显的抑制作用(P0.01);人参皂苷Rh1在较高剂量(40 mg·kg-1)时,对EAC也有明显抑制作用(P0.01)。但人参皂苷Rg1和Rh1对S180和HepA 无抗肿瘤作用。离体实验证明,Rg1对HeLa细胞的增殖有明显的抑制作用,Rh1高剂量组 (100 mg·L-1)对3种肿瘤细胞均有明显抑制作用。结论:人参皂苷Rh1较其前体Rg1具有更强的整体和离体抗肿瘤作用。 [关键词] 抗肿瘤药,植物;人参皂苷;人参皂苷Rg1;人参皂苷Rh1;抗肿瘤作用 [中图分类号] R961; R-332 [文献标识码] A 人参具有抗肿瘤作用已有许多报道[1-3]。近些年来,亦有人报道人参皂苷Rh1、Rh2和Rg3具有抗肿瘤作用[4-7]。本研究前期实验证明,给大鼠或人口服人参皂甙Rg1后,其在肠道内被肠内菌代谢成人参皂苷Rd、Rf1、Rh1和原人参三醇等代谢产物,人口服Rg1后其吸收入血的代谢产物为人参皂甙Rh1[8],因此对Rh1的药理作用,特别是对其抗肿瘤作用及其作用机制值得深入研究。本实验对前体人参皂苷Rg1和代谢物Rh1的抗肿瘤活性进行比较,以了解人参皂苷Rg1代谢前后活性的变化。 1 材料与方法 1.1 动 物 昆明种小鼠,雌性,18~22 g,购自东北师范大学动物室。 1.2 试剂及药品 人参皂苷Rg1和Rh1,由吉林大学天然药物研究室提供(纯度98%);注射用环磷酰胺(cytoxan,CTX),规格:200 mg/支,批号:980101,上海华联制药有限公司产品。 1.3 细胞株 离体抗肿瘤实验用以下3种瘤株:人黑色素瘤细胞(A375-S2)、人子宫癌细胞(HeLa细胞)、人胎儿胶质细胞瘤细胞(T98G细胞)。上述细胞均购自美国ACTT。整体抗肿瘤实验用以下4种瘤株:S180、EAC、U14和HepA,均为小鼠腹水传代,购自天津医药科学研究所。 1.4 仪 器 CO2培养箱(美国Revco公司产品);TLL-C型台式高速冷冻离心机(北京四环科学仪器厂产品);Olympus生物显微镜;37XA8光学倒置显微镜(日本Olympus公司);M450型酶标仪(美国BIORAD公司)。 1.5 实验方法 1.5.1 整体抗肿瘤实验方法 实验小鼠随机分为对照组(蒸馏水20 ml·kg-1,灌胃)、CTX(30 mg·kg-1,腹腔注射)、人参皂苷Rg1(200 mg·kg-1,灌胃)、人参皂苷Rh1(40和20 mg·kg-1,腹腔注射)5组。选取移植肿瘤7 d,肿瘤生长良好,腹部膨隆明显的小鼠,腹部皮肤消毒,用一次性无菌采血器经腹壁刺入腹腔,抽取腹水,放入无菌烧杯中,以生理盐水稀释成1:3(S180、EAC、U14)或1:2(HepA)的癌细胞混悬液,于每只实验小鼠右腋皮下接种0.2 ml[4]。各组动物于接种肿瘤次日开始给药,每日1次,连续给药10 d。当环磷酰胺组和Rh1组小鼠腹腔注射给药时,其它各组腹腔注射生理盐水10 ml·kg-1,对照组和Rg1组灌胃所试药物时,其余各组灌胃生理盐水20 ml·kg-1。给药结束次日,将动物称体重后拉断颈椎处死,剥离出皮下肿瘤组织称重,比较各组肿瘤生长情况。结果以x±s表示,组间比较采用t检验。 1.5.2 离体抗肿瘤实验方法 用消化液消化肿瘤细胞,调整细胞密度至2×105个·ml-1,接种于96孔培养板中(100μl/孔),置CO2培养箱培养24 h后,吸去孔内溶液,加入90μl培养液[RPMI1640培养液,加入5%小牛血清(NCS)及10μl样品(Rg1及Rh1浓度均为100、10、1 mg·L-1],各组均设不加NCS的平行对照组。置培养箱中培养24 h后,取出培养板,弃去上清液,用生理盐水100μl洗3次,加结晶紫10μl,10 min后,用流水洗至水无色,用酶标仪测4