药物分析_14生物药物分析要点解析.pptVIP

第十章 生物药物分析 基本要求 事故案例 2008年5月22日至28日，有6名在南昌大学第二附属医院就医的患者，使用江西某制药公司生产的批号静脉注射用人免疫球蛋白（pH4）后死亡。 江西省食品药品监督管理局采取紧急措施，对相关药品和资料进行封存，并责成该企业迅速召回该批次产品。 抽取样品送中国药品生物制品检定所检验，对相关药品和资料进行封存。 一、概述 化学药物 中 药 生物药物 1. 生物药物的分类（Ⅰ） 生物药物按来源和生产方法可分为： 生化药物：从动物、植物及微生物等生物体中分离提取的，以及用生物-化学合成、微生物合成或现代生物技术制得的生命基本物质及其衍生物等一类药物。 1. 生物药物的分类（Ⅰ） 生物技术药物：应用基因工程、细胞工程、蛋白质工程、发酵工程等现代生物技术获得的药物。 生物制品：用微生物、细胞及各种动物和人源的组织和体液等生物材料为原料制备的药物。 1. 生物药物的分类（Ⅱ） 按化学本质和化学特性可分为： 氨基酸及其衍生物类 蛋氨酸 谷氨酸 丙氨酸 多肽和蛋白质类 催产素 血清白蛋白 胰岛素 酶和辅酶类 胃蛋白酶 门冬酰胺酶 凝血酶 核酸及其降解物和衍生物类 5-氟尿嘧啶 6-硫代嘌呤 多糖类 肝素 人参多糖 透明质酸钠 脂类 卵磷脂 胆红素 前列腺素系列（ PGE1、PGE2和PG12 ） 细胞生长因子类 生长素 白细胞介素 肿瘤坏死因子 生物制品类 疫苗 2. 生物药物的特点 ① 生物药物的治疗针对性强，药理活性高。 细胞色素C用于治疗组织缺氧所引起的一系列疾病。 注射用的纯ATP可以直接供给机体能量。 ② 原料中的有效物质含量低，稳定性差 激素、酶在体内含量极低，且容易失活。生产过程中应低温、无菌。 ③ 毒副作用小，营养价值高。 蛋白质、核酸、多糖类、脂类等药物本身就直接取自体内，营养价值很高。 3. 生物药物分析的特点 ① 全过程的质量控制 此类药物对热、酸、碱、重金属以及pH较敏感，生物活性易发生变化，需对原材料、生产过程和最终产品进行质量控制。 ② 相对分子质量测定 除氨基酸、核苷酸、辅酶及甾体激素等属化学结构明确的小分子化合物外，大部分为大分子物质，其分子量一般几千至几十万。对大分子的药物而言，即使组分相同，往往由于分子量不同而产生不同的生理活性。 3. 生物药物分析的特点 ③ 生物活性检查 多肽或蛋白质类药物在制备过程中容易失活。因此，需用生物检定法证实药物的生物活性。 ④ 安全性检查 生物药物多从生物材料中提取，有可能引入特殊杂质、病菌和毒素等污染物，因此需进行安全性检查，如热原和细菌内素检查、异常毒性试验、过敏性试验、无菌检查等。 3. 生物药物分析的特点 ⑤ 含量（效价）测定 对酶类药物需进行效价测定或酶活力测定，以表明其活性成分含量的高低。 ⑥ 生化法确证结构 在此类药物中，由于有效结构或分子量不确定，其结构的确证很难沿用元素分析、IR、UV、NMR、MS等方法加以证实，往往还要用生化法如氨基酸序列、肽图分析等法加以证实。 二、生物药物的质量检定(Ⅰ) 1. 鉴别试验 利用化学法、物理法及生物学方法来确证生化药物的真伪。用标准品或对照品在同一条件下进行对照试验。 ① 理化鉴别 —化学鉴别法 呈色反应、沉淀反应 —UV法 紫外特征吸收 —HPLC法 色谱图的保留时间和肽图谱 化学鉴别法 溶菌酶的鉴别采用呈色法，溶菌酶分子中的四个肽键上的氮原子能与铜离子络合生成有颜色的配位化合物。肽键越多，颜色越深。 溶菌酶： — CONH — + Cu2+ →络合显色 胃蛋白酶是具有高效、专一催化活性的特殊蛋白质，与酸、碱、重金属或有机溶剂作用引起蛋白质变性，生成沉淀。 光谱法——UV法和IR法 细胞色素C是以含铁卟啉为辅基的结合蛋白，在磷酸盐缓冲液（pH7.3）中，还原型在550、520、415nm处有最大吸收；氧化型在280、361、410与529nm处有最大吸收。 三磷酸盐腺苷二钠、门冬氨酸、色氨酸等氨基酸类药物采用IR鉴别，将供试品的IR图谱与对照品的IR图谱进行比对。 HPLC法 胰岛素的鉴别 采用HPLC法，固定相为ODS，柱温40℃，流动相为0.1mol/L磷酸二氢钠溶液（pH3.0）-乙腈（73:27），检测波长214nm。 重组人生长激素 —供试品主峰的保留时间应与相应对照品的保留时间一致； —肽图谱供试品与对照品一致。 1. 鉴别试验(Ⅱ) ② 生化鉴别 —酶法 利用酶对底物特异性