RNAi基因功能研究的新技术教程分析.ppt

同时，在siRNA介导HIV的基因沉默实验中也得到了类似的结果，针对HIV-1基因组LTR和5个病毒编码基因的siRNA，可将HIV-1病毒的复制降低30-50倍。 Jacque等发现针对HIV-1基因组 LTR、Vif 和 Nef 的siRNA均能抑制病毒的复制。 Novina 等用针对HIV-1基因组结构蛋白Gag、调节蛋白Nef的siRNA，有效地抑制了HIV-1的感染，而针对HIV-1感染必需受体CD4的siRNA则降低了病毒侵入Magi-CCR5细胞的能力。 利用针对HIV RNA或其感染必需的受体CCR5的siRNA，可以将病人的骨髓干细胞改造成对HIV感染具有抵抗力的细胞。 以上研究表明，siRNA能抑制不同感染阶段的病毒复制，而感染的阻止既可用针对病毒基因的siRNA，也可以用针对参与病毒生活周期的宿主细胞基因的siRNA。 RNAi 在病毒基因治疗的研究方面也格外瞩目。目前己有多个实验室用RNAi技术对HIV、脊髓灰质炎病毒等的感染进行了研究，取得了令人激动的成果。他们用针对病毒基因组编码基因mRNA的siRNA成功地阻止了靶基因的表达，为病毒的基因治疗提供了全新的重要策略。 Gitlin等用针对脊髓灰质炎病毒基因组的siRNA处理人HeLa细胞，结果发现siRNA显著降低了病毒的滴度并促进感染细胞中病毒的清除，证实了siRNA能特异性地抑制胞内RNA病毒的快速复制。 由于肿瘤是一种多基因疾病，单一癌基因的阻断不可能完全抑制或逆转肿瘤的生长，而利用RNAi技术则克服了这一缺点，它能在体内同时特异性阻断多个癌基因的表达。Lin等把针对原癌基因bcl2的 mRNA cDNA杂交体转染到人前列腺癌 LNCaP 细胞中，对bcl2基因表达产生了较长时期的抑制。这一效应与体外培养的前列腺癌细胞中的 RNAi 相似，表明RNAi可用于B细胞淋巴瘤和白血病的基因治疗。 Wilda等用特异dsRNA诱导的RNAi来杀死含有BCR/ABL融合基因的白血病细胞。他们用针对M-BCR/ABL融合基因的dsRNA转染K562细胞，定量PCR及Western blot分析发现对应mRNA和M-BCR/ABL癌蛋白(oncoprotein)均减少，而BCR/ABL的减少则强烈地诱导细胞的凋亡。上述结果为深入研究将RNAi用于杀灭基因异常的肿瘤细胞的基因治疗开辟了新的领域。 The chemokine receptors CCR-5 and CXCR-4 are the principle coreceptors of HIV-1 infection. R5 (macrophage, M) tropic HIV-1 strains mainly use CCR-5, X4 (T cell line-tropic) use CXCR-4. We investigated whether vector-based siRNA would down-regulation of CCR-5 and CXCR-4 surface expression. Transduced cell lines were assayed by FACS. Inhibition of HIV-1 infection by siRNAs targeted against CCR-5 and CXCR-4 siRNA 特异性阻断T淋巴细胞表面CCR5, CXCR4的表达 CCR5 CXCR4 PM-1 PM-1/pSU3 pooled PM-1/pSU5 pooled CD3 CD4   The CXCR4 expression on cell surface has a critical role in infection of HIV-1 and determining the metastasic destination of breast cancer and other cancers. Blocking of CXCR4 expression on breast cancer cell surface by vector-based siRNAs     CXCR4 MDA-MB-231 Control pSU/siRNA Colony 1 pSUPER pSU/siRNA Colony 2 siRNA 特异性阻断乳腺癌细胞表面CXCR4的表达 展望与思考 从RNAi 的发现至今，仅仅几年的时间，RNAi就已成为生命科学研究中的热点，充分说明