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实验五 柱层析 有机化学与药物化学教研室 柱层析 将固定相装于柱管内构成层析柱，层析过程在层析柱内进行。按层析柱的粗细差别，可分为填充柱层析法、毛细管柱层析法及微填充柱层析法等。 一、实验目的 1. 掌握柱层析的原理和基本操作。 2. 利用柱层析的方法分离和提纯有机物。 二、实验原理 柱色谱是利用混合物中各组分受吸附作用的不同以及各组分在溶剂中溶解度的差别，将各组分分离。可分为吸附柱层析和分配柱层析。 吸附柱层析 预分离的混合物随着流动相通过色谱柱，在固定相上反复发生吸附－洗脱－再吸附－再洗脱。由于各组分吸附能力不同，经过一段时间，按对吸附剂亲和力大小，形成不同色带而分离。 影响吸附柱层析的因素 吸附剂 柱色谱常用的吸附剂是氧化铝和硅胶。吸附剂应进行纯化和活化处理，含水量越低，活性越高。 化合物的极性和吸附能力 化合物的吸附性与分子极性成正比。分子极性越强，吸附能力越大。 洗脱剂 先用极性小的溶剂洗脱，后改用极性强的溶剂洗脱。使化合物按极性与小到大顺序出柱。 三、仪器和药品 色谱柱、玻璃漏斗、滴液漏斗、100ml烧杯一个、150ml锥形瓶二个、滴定台（或铁架台）、剪刀、玻棒 0.05%甲基橙和0.25%亚甲基蓝混合乙醇溶液[1]、 100～200目中性色谱用氧化铝、无水乙醇、0.1mol/L盐酸溶液、蒸馏水、脱脂棉、滤纸 （[1] 称取110mg甲基橙和550mg亚甲基蓝于250ml 95%乙醇中溶 解。） 四、实验步骤 1、装柱 取清洁干燥的色谱柱，管底垫少许棉花，防止氧化铝漏下。倾入无水乙醇20ml，称取15g柱用氧化铝，经漏斗缓慢倒入管中，同时轻轻拍打色谱柱，用无水乙醇清洗沾在管内壁上的氧化铝。打开活塞，氧化铝随着溶剂流动继续下沉，直至沉降停止。在氧化铝表面平整紧贴地覆盖一张略小于色谱柱内径的滤纸，打开活塞使氧化铝表面仅留一薄层约1mm的溶剂。 2、加样 在色谱柱表面小心加入亚甲基兰和甲基橙的混合溶液5-8滴（注意勿使样品沾在色谱柱的内壁上）。 3、洗脱 打开活塞，使样品液全部进入吸附剂（勿使流干）。加入无水乙醇，打开活塞使蓝色谱带完全进入吸附剂，关闭活塞；重复二次，蓝色谱带逐渐下移。继续加无水乙醇，使亚甲基蓝完全洗脱，收集于第1个三角锥瓶。改用蒸馏水作洗脱剂（操作步骤与以无水乙醇作洗脱剂相同），使甲基橙完全洗脱，收集于第2个三角锥瓶。滴加盐酸溶液可发现变红。 注意事项 1.加入氧化铝时动作要缓慢，使之均匀加入，以防在柱中间流下气泡。若已有气泡则拍打层析柱。 2.氧化铝平面上要保持一定液面。 3.收集到亚甲基兰之前收集的乙醇可反复使用。 * * *