色谱条件的选择教程详解.ppt

6. 固定液配比（涂渍量）的选择 2. 载气流速的选择 3.柱温的确定 程序升温 4.气化温度的选择 * * 一、分离度的最佳化 二、色谱柱参数选择 三、操作参数的选择 第三章 色谱条件的选择 choice of chromatographic operating condition 理想的色谱条件： 在较短的时间内获得较高的分离度，同时还要具有适当的柱容量。 色谱条件的选择依据： 一般而言，首先要保证分离度和速度，其次是柱容量。 色谱条件选择方法： 理论估计和实验比较相结合。综合考虑确定。 色谱条件特点： 分离度、分析时间和柱容量三者之间相互制约。 一、分离度最佳化： 使R在1.0~1.25范围内 r 21 r - 21 1 R＝ 4 n理 1+k k 依据: k增大， 增加，则R增加，但当k增大到一定程度 时， 趋近于1，其对分离度影响变小，因此容量因子 没必要太大。另一方面，且k增大时，保留时间增长，谱带 加宽，色谱峰检测难度加大。 结论：一般k=1－10即可，最佳值为2－5。 k 1＋ k k 1＋ k 1、容量因子k对分离度R的影响: 容量因子调节： 容量因子与固定相的性质、厚度及柱温有关。 选择与样品之间作用力大的固定相，k大； 固定液液膜增厚， k增大； 温度降低， k增大； 2、相对保留值r21对分离度R的影响 r21从1.001 1.500， 从10-3 0.333，增大了300倍。 r 21 r - 21 1 思考题： 对于一个分析任务r21越大越好吗？ r21增大，R提高， r21趋近于1时，需要的理论塔板数很大，而r21稍微增大，n有效即可大幅度下降，即柱效提高。 一般当r211.1时，首要问题是设法增加r21，否则不管理论塔板数如何增加，都不能实现理想分离。 反之，如果两个相邻峰的r21足够大，如r21＝2时，即使峰扩展很严重，分离也能轻而易举地实现。 因此，当r21较小时，增大r21是改善分离度的最有效的手段。 思考题：如何提高r21？ 在GC中， r21的大小主要取决于固定相的性质和柱温。 3、理论塔板数n有效对分离度R的影响 n有效增加，R提高，但分析时间延长。 n有效与固定相的性质、柱长及流动相的流速有关。 分离参数选择一般规则： 首先调整容量因子k值至2－5，复杂混合物为1－10； 其次确定n有效值，即选择合适的固定相和载气流速； 最后再通过r21调整R。 二、色谱柱参数的选择 1、柱材质及其选择： 常见填充柱材质有：不锈钢、玻璃和聚四氟乙烯。 选择依据：样品性质（化学活性、腐蚀性等）、操作条件（柱温、柱压）； 不锈钢柱：坚固耐用、耐高温、耐压，便于同仪器连接； 但化学性质不够稳定，内表面不够光滑，可能与活泼样品发生作用。 玻璃柱：化学性质稳定，内表面光滑，耐腐蚀，没有催化效应，适用于分析酸类、含卤和腐蚀性化合物； 但易碎，安装和使用时均需小心。 聚四氟乙烯柱：耐腐蚀，易弯成任一形状，结实； 但不耐高温。 2、柱型及其选择： 填充柱有直管、U形管和螺旋管。 短柱一般用U形管；长管一般用螺旋管，但螺管直径一般要比色谱柱内径大15－20倍以上，否则影响柱效。 柱效：直管U形管螺旋管 3、柱内径选择： 内径粗，固定相填充不均匀，A项大，峰扩展严重，柱效低；柱内径细，峰尖，柱效高； 但柱内径太细会造成填充困难。 一般填充柱内径为：2－6mm，大多3－4mm。 4、柱长选择： 增加柱长对提高分离度有利(分离度R 2正比于柱长L)但组分的保留时间tR↑,且柱阻力↑,不便操作。 柱长的选用原则是在能满足分离目的的前提下，尽可能选用较短的柱，有利于缩短分析时间。 填充色谱柱的柱长通常为1－3米。 可根据要求的分离度通过计算确定合适的柱长或实验确定。 柱长选择方法：先在一个已知长度L1的柱子上初步实验测得一个R1值，然后根据要求的分离度R2利用下式： L R R L 1 2 1 2 2 = 2 求出L2 5. 固定相的选择 气－液色谱，应根据“相似相溶”的原则 ①分离非极