第八章基因重组蛋白包涵体的复性分析.pptVIP

色谱法复性 亲和色谱复性：可以在所要表达的蛋白的N端或C端加上一段重复的His或Arg片段（His-Tag or Arg-Tag），构建成融合蛋白，这样重组蛋白可以利用它们的Arg-Tag或 His-Tag结合到金属（Ni、Zn或Co）离子亲和色谱柱上，然后进行复性，最后用咪唑或pH梯度洗脱下来，如对大肠杆菌表达的重组Toc75和LHC2复性。 亲和层析 各种重组蛋白质复性方法的比较 复性方法 复性率 蛋白浓度 过程集成性 成本 传统方法(稀释、透析、超滤) 蛋白浓度低时高 蛋白浓度高时低 低 无 低 改进后传统方法（温度跳跃、分批进料、连续进料） 较高 较高 无 较低 新方法 抗体法 高 高 无 高 分子伴侣法 高 高 无 高 人造 分子伴侣法 高 高 无 较低 反向微团法 高 低 无 较低 双水相法 不明 不明 将包涵体的溶解与蛋白的复性过程集成 较低 色谱法 高 高 将蛋白的复性与纯化过程集成 较低 复习 重点 第一章 概论 分离技术的发展趋势 第二章 生物产品分离提取技术 细胞破碎,萃取方法,沉淀方法 重点章节 色谱技术 亲和分离技术 电泳分离技术 * 选择标志的编码序列，可供筛选已确定载体是否进入了细胞 可控转录启动子（如lac、Trp或tac） ，经诱导后从