第讲克隆基因的表达与产物纯化外源基因在原核细胞中的表达分析.pptVIP

六、影响外源基因表达效率的因素 1. 启动子的结构对表达效率的影响 (1)一致顺序 越接近一致顺序，启动子越强。 (3) -35区和-10区的碱基顺序 (2) -35区与-10区之间的距离 间隔为17bp时，启动子最强。 2. 转译起始序列对表达效率的影响 (1) S-D序列 5’-AGGAGGU-3’ S-D序列后面的4个碱基： 如果是A（T）, 翻译效率最高； 如果是G（C）,效率只有50%或25%。 (2) 起始密码AUG AUG左侧的三个碱基也有影响。 β-半乳糖苷酶的mRNA中： AUG左侧如果是UAU或CUU时，最为有效； 如果是UUC、UCA或AGG时下降20倍。 (3) 其它 多顺反子的mRNA与核糖体的结合位点有一个或几个终止密码。 噬菌体外壳蛋白或核糖体蛋白mRNA的核糖体结合位点有多个U。 3. 启动子与外源基因之间的距离 4.转录终止区对表达效率的影响 5.载体拷贝数及稳定性对表达效率的影响 6.外源蛋白在菌体中的稳定性对表达效率的影响 转录终止区的存在保证载体不会转录非必须基因， 不必浪费源量和能量、不会干扰正常的表达。 增加载体的拷贝数会增加转录出的mRNA数目。 增加表达效率。 但过度的外源基因的表达会影响宿主的正常生长。 七、提高表达水平常用的方法 1. 选择强启动子序列，如 tac 等 2. 调整S-D序列与AUG碱基的距离 3.改变起始密码