医学分子生物学-2蛋白质的修饰与降解.ppt

蛋白质经自噬降解的反应过程 自噬的诱导激活 自噬体的成核和延伸 自噬体与溶酶体融合及内容物的降解 自噬发生过程 自噬激活 成核和延伸 自噬体 溶酶体 自噬溶酶体 自噬的诱因 细胞外（缺血、 缺氧、 营养及生长因子不足等）； 细胞内（代谢压力、 衰老、 损伤的细胞器、 蛋白质折叠错误等） 自噬的生物学意义 细胞内自噬通常维持在很低的水平，在应激条件下被诱导，对细胞具有一定的保护性，细胞通过自噬维持自身的稳定。 自噬体系和蛋白酶体系之间的相互联系 不同的蛋白质降解途径相互依赖 自噬与UPS之间在功能上有重叠 错误折叠蛋白可被巨自噬降解 自噬与UPS可以相互影响 蛋白质降解的研究策略 1. UPS通路研究策略 UPS通路各因子的 mRNA 核蛋白水平检测 蛋白酶体功能检测 蛋白酶体抑制剂的应用 2. 自噬的研究策略 自噬形成的稳态监测：透射电镜下自噬结构 自噬体膜标志性蛋白的检测：LC3-Ⅱ Beclin-1 TOR和Atg1激酶活性检测 自噬的研究策略 1.自噬形成的稳态监测：透射电镜下自噬结构形态学检测为检测自噬体的“金指标”。特征为新月形或杯状，双层或多层膜，有包绕胞质的成分。 2.自噬体膜标志性蛋白的检测：LC3-Ⅱ Beclin-1 3.TOR和Atg1激酶活性检测：通过检测两者的活性反应自噬发生情况。 透射电镜下自噬体 * * * * * SUMO化修饰的生物学意义 SUMO化核内底物多数是转录调节因子，进行正调控或负调控； 参与维持基因组的完整性及调节染色体凝集与分离； 参与DNA修复过程； 拮抗泛素的作用，避免蛋白质降解。 调节蛋白质核质转运及信号转导。 六、巴豆酰化修饰 概念： 是指在巴豆酰基转移酶催化下，在蛋白质赖氨酸添加巴豆酰基的过程。 蛋白质巴豆酰化修饰的生物学意义 组蛋白赖氨酸巴豆酰化修饰与基因活化密切相关，机制目前尚不清楚。 七、不同翻译后修饰的相互协调与影响 1.在细胞信号转导过程中存在多种蛋白质翻译后修饰 脂基化修饰是蛋白质磷酸化的开端，磷酸化修饰过程分别受到特定蛋白激酶调节，是细胞信号转导过程的主体。 2.一种蛋白质可以有一种以上的翻译后 在RNA聚合酶Ⅱ控制的基因表达过程中，磷酸化和糖基化对RNA聚合酶Ⅱ起到了不同的作用。 组蛋白乙酰化和甲基化共同修饰作用 八、蛋白质修饰的研究策略 尽管蛋白质翻译后修饰对其生物学功能有着重要的作用，目前对其规模化研究受到分析方法的限制。主要由于翻译后修饰蛋白质的化学计量低，复杂性造成的。蛋白质修饰类型及程度差别大，有的修饰转瞬即逝。 利用电泳、免疫共沉淀、色谱、生物质谱、生物信息学等方法，对修饰蛋白质及修饰位点进行鉴定。 第二节 蛋 白 质 的 降 解 蛋白质的降解途径 泛素-蛋白酶体通路：需能，高效、特异的蛋白质降解过程，控制着动植物体内绝大多数蛋白质的降解。 自噬-溶酶体：不需能量。主要降解细胞外和细胞膜蛋白质 泛素-蛋白酶体系统 1980年前后Ciechanover A，Hershko A和Rose Ⅰ发现了泛素-蛋白酶体系统（ubiqutin-proreasomesystem，UPS） 2004年获诺贝尔化学奖 UPS参与细胞内80%以上蛋白质的降解 UPS组成 有酶促活性的蛋白酶体 20S核心颗粒和蛋白酶体激活因子 选择性降解短寿命的调节蛋白和损伤蛋白。 人体有三种蛋白酶体激活因子 19S（PA100）、11S（PA28或REG）和PA200。 ATP和泛素依赖的UPS组成 19S蛋白酶体激活因子结合20S蛋白酶体， 形成26S蛋白酶体。 细胞内大多数蛋白质泛素化后，都经26S蛋 白酶体进行降解。 26S蛋白酶体的结构 不依赖ATP和泛素的UPS组成 11S蛋白酶体激活因子（PA28或REG）因不含ATPase活性，可不依赖ATP和泛素介导蛋白酶体进行蛋白质降解。 PA200是分子量为200kDa单体结构激活因子，可激活蛋白酶体降解肽，而不能降解蛋白质。 UPS的分类 三种激活因子与20S蛋白酶体至少可组成四种蛋白酶体复合体：19S-20S-19S，11S-20S-11S,11S-20S-19S，PA200-20S-19S 大多数蛋白质通过26S蛋白酶体以ATP和泛素依赖方式降解；11S-20S-11S,11S-20S-19S，PA200-20S-19S以不依赖ATP和泛素的方式降解一些调节蛋白、氧化蛋白及衰老蛋白。 泛素的结构与组成 泛素含有76个氨基酸残基,广泛存在于真核生物， 泛素的氨基酸序列极其保守。 泛素共价结合于底物蛋白的赖氨酸残基上，将底物蛋白进行泛素化标记而被