基因工程的工具酶和载体分析.ppt

第一章 基因工程 DNA连接酶的功能：连接“梯子”断口的“扶手”而非“梯子”中间的“踏板”。你认为这里的“扶手”和“踏板”分别代表什么？ 踏板 扶手 特别注意：DNA连接酶的作用部位是磷酸二酯键，而不是氢键。 解旋酶 踏板 OR 扶手 双链DNA：比喻成一个梯子 氢键 磷酸二酯键 限制性内切酶 DNA连接酶 DNA聚合酶 最关键：目的基因+载体→重组DNA 先切割后连接 ① ① ② ①用同一种限制性核酸内切酶分别切割目的基因和载体质粒。 ②用DNA连接酶将目的基因和载体DNA连接在一起，形成重组质粒。 质粒 目的基因 重组质粒 * 第一节 工具酶的发现和基因工程的诞生 基因决定性状 青霉菌 青霉素 问题1：青霉菌能产生对人类有用的抗生素—青霉素，能否让细菌产生出人的胰岛素和干扰素等珍贵的药物呢？ 问题2：家蚕能够吐出蚕丝为人类利用，能否让细菌“吐出”蚕丝？ 斑马鱼 什么是基因工程？ 神奇的荧光鱼 基因工程：又DNA重组技术，把一种生物的基因转入另一种生物体内，使其产生我们需要的基因产物，或者让它获得新的遗传性状。 发荧光的水母 基因工程如何诞生？ （1）理论上的三大发现 肺炎双球菌转化实验：格里菲斯和艾弗里，发现了生物的遗传物质是DNA，而不是蛋白质。 明确了DNA的双螺旋结构和半保留复制机理。 1953 年美国沃森和英国克里克 半保留复制 破译了具有通用性的遗传密码 （2）技术上的三大发明 三大工具：①手术刀： 限制性内切酶；②缝合针：DNA连接酶；③运载体：质粒。 1973年，美国斯坦福大学，S.Cohen小组，体外重组并转化成功。 1973年—基因工程诞生 思考1：如何将水母的荧光蛋白基因（目的基因）从水母的 DNA 中分离出来？ 基因的“剪刀”：限制性核酸内切酶，1970年首次从细菌中分离得到。 手术刀：限制性核酸内切酶 EcoRⅠ： 识别GAATTC序列，并在G和A之间切割。 限制性核酸内切酶：一类能够识别和切割DNA分子内一小段特殊核苷酸序列的酶（主要从细菌中分离）。 粘性末端2 粘性末端1 限制性内切酶切割DNA过程 特点：具有特异性，一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列，并在特定位点上切割双链DNA分子。 限制酶有何特点？ 限制酶有成百上千种 思一思，练一练 限制酶：只切割磷酸二酯键 氢键自动断裂 回文序列 5′ 3′ 5′ 3′ 5′ 5′ 3′ 3′ 3′ 5′ 3′ 5′ 基因的“剪刀”—限制酶 特别注意：限制酶切割的是脱氧核苷酸之间的磷酸二酯键，而不是切割碱基之间的氢键。 什么是粘性末端？ G A A T T C G C T T A A A A T T C G C T T A A G EcoRⅠ 错切：从中轴线两侧切开 特别注意：用同一种限制酶切割后形成的黏性末端能够碱基互补配对。 回文序列 C C C G G G G G G C C C 什么是平末端？ SmaⅠ C C C G G G G G G C C C 平切：从中轴线处切开 特别注意：错切产生粘性末端，平切产生平末端。 例题：下列关于限制酶的说法正确的是（ ） A. 限制酶广泛存在于各种生物中，但微生物中少 B. 一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列 C. 不同的限制酶切割DNA后都会形成黏性末端 D. 限制酶的作用部位是特定核苷酸形成的氢键 来源 作用结果 作用部位 特点 限制性核酸内切酶 从原核生物中分离出来 特异性 磷酸二酯键 形成粘性末端或平末端 例题：假设某病毒的一段序列如下图所示，其中某部位可被限制性内切酶A识别并切割，则限制性内切酶A识别的序列为以下哪个（ ） —CGTCATCGATGATGCAGCTC— —GCAGTAGCTACTACGTCGAG— A. -ATGATG- B. -ATCGAT- C. -TGCAGC- D. -CAGCTC- 限制酶的识别位点具有回文序列 —CGTCATCGATGATGCAGCTC— —GCAGTAGCTACTACGTCGAG— 何谓回文序列？ 特别注意：限制性核酸内切酶的识别序列具有180°旋转对称的回文结构。 例题：某DNA分子中含有某限制性核酸内切酶的一个识别序列，用该限制酶切割该DNA分子，可能形成的两个DNA片段是（ ） 思考2：如何将水母的荧光蛋白基因运送至斑马鱼细胞中？ 基因工程的载体主要有：质粒（最常用）、λ噬菌体、动植物病毒。 运输载体：质粒 质粒：细菌拟核外能够自主复制的双链环状DN