第三课转基因动物ljl概述.ppt

* * * * * * * * * * * * * * * 转基因动物技术使动物和人体基因工程研究从以往的单基因离体水平的操作，发展到了离体和在体相配合的、分子和细胞水平操作的，有动物整体水平产生效应的崭新阶段，它使得人们能从更完整的系统中去认识生物分子的作用，应用前景广阔。 转基因动物研究的意义和作用： 1、生命现象的基础研究。转基因动物是对多种生命现象本质深入了解的工具，如研究基因的结构与功能的关系，细胞发育的潜能性、细胞核与细胞质的相互关系、胚胎发育调控、肿瘤、神经与发育等。 2、可以用来建立多种动物模型，进而研究这些疾病的发病机理、治疗方法及新药的筛选。 3、可作为医用或食用蛋白的生物反应器。通过家畜乳腺分泌大量安全、高效、廉价的人体药用蛋白，一直是转基因动物研究的热点。现在已有数十种人体蛋白在家畜乳腺中表达，这些蛋白可以用于治疗人类相关疾病。 4、利用基因敲除技术提供廉价的异种移植器官。只要将引起强烈免疫排斥反应的异源分子基因敲除掉就可以。例如培育不含免疫排斥的转基因克隆猪。 5、改良和培育动物新品种。如使生长速度加快，瘦肉率提高、肉质改善、饲料利用率提高、抗病力增强等 6、基因治疗。人类第一例于1990年对SCID综合症的小孩实施体细胞基因治疗获得成功。 转基因动物的饲养管理 １、避免混淆。在转移小鼠笼时，务必将鼠笼标记信息和笼内小鼠一起转移。 ２、转入病毒全基因组的动物，病毒可能在体内复制，可能与接种病毒的小鼠有类似的逸散、传播方式和感染途径。 3、逃逸。造成遗传污染，改变自然界的生态平衡、改变生物的多样性和破坏生态环境。 防逃逸设施至关重要 小鼠标记方法 在小鼠2－3周龄时，就可以将幼鼠分笼。由于母鼠孕期为21天左右，所以为了避免下一窝幼鼠的出生，前一窝幼鼠一般要在3周龄以前分笼。 将小鼠按雄性和雌性分笼，一个笼子一般不超过5只小鼠。 分好笼后，对小鼠按下面图示做标志，并记录好母系、父系和代数。做标记的同时，对每只小鼠剪2－3 mm的尾巴用于做基因鉴定。 小鼠基因鉴定 从小鼠尾巴中提取基因组DNA 聚合酶链反应（PCR） 电泳鉴定 练习题 了解转基因动物技术的发展进程，简述实现外源基因的导入及整合技术的四个发展阶段 了解三种外源基因导入方法 了解原核注射转基因鼠制备的基本过程 简述基因敲除的技术路线 简述Cre/LoxP重组酶系统的作用原理 掌握转基因鼠的命名方法和突变命名规则（举例） 细菌人工染色体 (bacterial artificial chromosome,?BAC) 转基因系统 可以把克隆载体的发展划分为三个阶段:第一阶段以质粒( plasmid) 、λ 噬菌体(λ2 bacteriophage) 、柯斯质粒(cosmid ,又称粘粒) 为主,主要特点是载体在宿主细胞内稳定遗传、易分离、转化效率高,但是克隆容量有限,一般小于45kb。第二阶段的克隆载体则突破了上述载体容量,显著特点是载体的容载能力扩大,约100～350kb ,主要有酵母人工染色体(yeast artificial chromosome ,YAC) 、细菌人工染色体( bacterial artificial chromosome ,BAC) 以及源于噬菌体P1 的人工染色体(Pl2derived artificial chromosome ,PAC) 。第三个发展阶段是以近几年发展起来的双元细菌人工染色体(binary BAC ,BIBAC) 和可转化人工染色体( transformation2competent artificialChromosome ,TAC) ,这些载体不仅具有较大的克隆容量,而且具备了直接转化植物进行功能互补实验的功能。 * * 条件性基因敲除法可定义为将某个基因的修饰限制于小鼠某些特定类型的细胞或发育的某一特定阶段的一种特殊的基因敲除方法 它实际上是在常规的基因敲除的基础上，利用重组酶Cre介导的位点特异性重组技术，在对小鼠基因修饰的时空范围上设置一个可调控的“按钮”，从而使对小鼠基因组的修饰的范围和时间处于一种可控状态。 五 条件基因敲除转基因动物 靶基因的敲除限定于特定时间和某一特定组织细胞内，这将使基因剔除技术具有更大的应用价值。 应用ES细胞和同源重组原理而发展起来的基因打靶技术使转基因动物的研究又向前迈进了一步，但仍有其局限性。 主要问题是，虽然通过基因打靶实现了外源基因在受体细胞基因组中的定点整合，但这种整合是没有组织特异性的，因此尚不能使外源基因仅在特定的组织中表达。 Cre/loxP系统的发现及应用实现了外源基因的组织特异性表达。 Cre/LoxP重组酶系统 ① Cre 重组酶介导的DNA重排