细胞迁移详解.ppt

* 细胞迁移 cell migration 细胞迁移 细胞迁移 参与细胞迁移的分子 活动机制 生理过程 检测 简介 细胞迁移—简介 细胞迁移（英文：cell migration，中文也称细胞移行、细胞移动或细胞运动） 指的是细胞在接收到迁移信号或感受到某些物质的浓度梯度后而产生的移动。过程中细胞不断重复着向前方伸出伪足，然后牵拉胞体的循环过程。 细胞骨架和其结合蛋白是这一过程的物质基础，另外还有多种物质对之进行精密调节。 路标信号 信号分子可能并不一定要形成浓度梯度才能为细胞指路，或者只要它做出连续的分布让细胞“顺瓜摸藤”即可，甚至是沿途的不迁移细胞，在自身胞膜表面表达一些蛋白质，做出“邀请”或是“排挤”的姿态。 极化 当细胞胞膜上的受体接触到周围环境里面的迁移信号分子之后，细胞内部与细胞迁移有关的物质会重新分布，细胞显出“前”和“后”两端，为迁移做准备。 细胞迁移—活动机制 化学趋向性 细胞的化学趋向性是指细胞具有沿着外界某一物质的浓度朝向或是背离发放源运动，甚至形变的能力，这是一种基本的细胞反应。 1.迁移方向的确定和极化 突出与底质粘着 牵引尾部向前 细胞迁移—活动机制 2.迁移的四步骤 细胞前端突出 细胞体前移 细胞迁移—参与细胞迁移的分子 细胞外 (肽，代谢产物，细胞壁或是细胞膜的残片) 细胞内 （膜上受体 G protein） 信号分子 微丝和其结合蛋白 微管 中间纤维 细胞骨架 其构象会随着与ATP和ADP的交替结合而改变， ATP水解的能量转化为机械能 ，引起马达形变，或者是它和与其结合的分子产生移动 分子马达 细胞迁移—相关的生理过程 脊椎动物的神经嵴细胞 无脊椎动物如海胆的原肠胚形成过程 胚胎发生 致病源微生物对宿主细胞的入侵同样会造成微丝的动态改变。 细菌感染 再生 纤维性修复 损伤修复 癌细胞的增殖与转移 癌症转移 白细胞的渗出是炎症反应最重要的特征 白细胞渗出 Transwell invasion assay 细胞划痕 检测方法 细胞迁移—检测 细胞迁移—检测 transwell 将Transwell小室放入培养板中，上室内盛装上层培养液，下室内盛装下层培养液，上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔。 我们将细胞种在上室内，由于聚碳酸酯膜有通透性，下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞 。 应用不同孔径和经过不同处理的聚碳酸酯膜 可以进行共培养、细胞趋化、细胞迁移、细胞侵袭等多种方面的研究。 （1）共培养体系： 小于3.0um孔径条件下，细胞不会迁徙通过，因此，若研究不涉及细胞运动能力，不需要细胞穿过聚碳酸酯膜，则应选择3.0μm以下孔径。 将细胞A种于上室，细胞B种于下室， 可以研究细胞B分泌或代谢产生的物 质对细胞A的影响。 Transwell ??????? ? （2）肿瘤细胞迁移实验 常用8.0、12.0μm膜，上室种肿瘤细胞，下室加入FBS或某些特定的趋化因子，肿瘤细胞会向营养成分高的下室跑，计数进入下室的细胞量可反映肿瘤细胞的迁移能力。 Transwell ??????? ? （3）肿瘤细胞侵袭实验 常用8.0、12.0μm膜，原理与肿瘤细胞迁移实验类似。 上室种肿瘤细胞，下室加入FBS或某些特定的趋化因子，肿瘤细胞会向营养成分高的下室跑 Transwell ??????? ? 基质胶再水化。 1 制备细胞悬液。 2 接种细胞。培养细胞 3 有基质胶的Transwell小室制备 细胞计数。 4 Transwell—细胞计数 荧光试剂检测 MTT法 ① 用棉签擦去基质胶和上室内的细胞 ② 染色 ③ 细胞计数：我们使用的是Leica DC 300F正置显微镜进行观察和拍照，把Transwell小室反过来底朝上就可清楚看到小室底膜上下室侧附着的细胞。 结晶紫检测 ? 谢 谢！ 细胞要“有效”的运动，首先要确定哪里是“前方”，否则会出现细胞体两部分同时向相反方向运动的情况（这在一些神经系统不发达的无脊椎动物中是可以见到的）。而这个确定方向的过程，其实是细胞内与运动有关的物质，如钙离子，肌球蛋白，和各类细胞骨架物质的浓度重新分布的过程，因此细胞显出“极性”，这个重新分布的过程也因而被称为细胞“极化”（Polarization）。细胞可以靠其表面的受体顺着诱饵的浓度“嗅”到其发放的源头，或者“感受到”底质上的“路标”而确定自身去向，前者被称为细胞的化学趋向性。这两种机制好比一个人或者是顺着楼梯行进或是依着路标的指示驾驶一样。