原核基因表达调控模式技术方案.ppt

原核生物细胞的基因和蛋白质种类较少，如大肠杆菌基因组约为4.60×106bp共有4 288个可以框架。据估计，一个细胞中总共含有107个蛋白质分子。如果每个基因等同翻译的话，任何一个多肽应有2 500拷贝。但是，这些蛋白质并不是以相同拷贝数存在于每个细胞中的，有些蛋白质的数目相当固定，另一些则变化很大。 每个大肠杆菌细胞有约15 000个核糖体，50种核糖体蛋白、糖酵解体系的酶、DNA聚合酶、RNA聚合酶等都是代谢过程中必需的，其合成速率不受环境变化或代谢状态的影响，这一类蛋白质被称为永久型（constitutive）合成的蛋白质。 7.1.1基因表达调控的基本概念 顺式作用元件：对基因表达有调节活性的DNA序列，其活性只影响与其自身同在一个DNA分子上的基因；顺式作用元件通常不编码蛋白质，多位于基因旁或内含子中。如启动子、终止子、操纵基因等。 反式作用因子：通过扩散自身表达产物（酶、调节蛋白）控制其他基因的表达,反式作用因子通常为的蛋白质或RNA。如调控蛋白、转录因子等。 基因表达的调控主要通过反式作用因子和顺式作用元件相互识别、相互作用而实现。 转录因子（transcription factor ）是转录起始过程中RNA聚合酶所需要的辅助因子。转录因子是参与正调控的反式作用因子，在无转录因子时，RNA聚合酶不能起始转录。 转录因子通常识别位于基因上游启动子附近的顺式作用元件。 原核生物的基因调控主要是转录调控，包括负转录调控和正转录调控。 在负转录调控系统中，调节基因的产物是阻遏蛋白（repressor），阻止结构基因转录。根据其作用特征又分为负控诱导和负控阻遏两大类。 在负控诱导系统中，阻遏蛋白不与效应物（诱导物）结合时，结构基因不转录；在负控阻遏系统中，阻遏蛋白与效应物结合时，结构基因不转录。阻遏蛋白作用于操纵区。 在正转录调控系统中，调节基因的产物是激活蛋自(activator)。也可根据激活蛋白的作用性质分为正控诱导系统和正控阻遏系统。在正控诱导系统中，效应物分子(诱导物)的存在使激活蛋白处于活性状态；在正控阻遏系统中，效应物分子的存在使激活蛋白处于非活性状态。 细菌中的转录调控体系：(c)负控阻遏体系； (d)正控阻遏体系 参与大肠杆菌中基因表达调控最常见的蛋白质可能是σ 因子，基因组序列分析后发现至少存在六种 σ 因子 。除σ54外，因子在结构上具有同源性，统称σ70家族，含有4个保守区，其中第2个和第4个保守区参与结合启动区DNA，第2个保守区的另一部分还参与双链DNA解开成单链的过程。 大肠杆菌中的б因子(以б70为例)主要包括四个结构域。 σ54因子识别并与DNA上的-24和-12区相结合。σ70启动子只有在核心酶结合到DNA链上之后才能与启动子区相结合，而σ54则类似于真核生物的TATA区结合蛋白（TBP），可以在无核心酶时独立结合到启动子上。 σ70 （上）和σ54 （下） 因子识别并结 合在所调控基因上游的不同区域。 7.1.3 原核基因调控的主要特点 原核生物通过特殊代谢物调节基因活性主要分为可诱导调节和可阻遏调节: 1.可诱导调节 是指一些基因在特殊的代谢物或化合物的作用下，由原来关闭的状态转变为工作状态，即在某些物质的诱导下使基因活化。这类基因中最突出的例子是大肠杆菌的乳糖操纵子。 大肠杆菌在含有葡萄糖的培养基中生长良好，在只含乳糖的培养基中开始时生长不好，直到合成了能够利用乳糖的一系列酶，具备了利用乳糖作为碳源的能力才开始生长。 细菌获得这一能力的原因就是因为在诱导物乳糖的诱导下启动了乳糖操纵子，表达它所编码的3个酶:β-半乳糖苷酶使乳糖水解为半乳糖和葡萄糖)，β-半乳糖苷透过酶(使乳糖进入细菌细胞内)，β-半乳糖苷乙酰基转移酶(使β-半乳糖第六位碳原子乙酰化)。因此，这类基因被称为可诱导基因，这类酶被称为诱导酶，这个生物化学过程被称为酶的诱导合成。 2.可阻遏调节 这类基因平时都是开启的，处在产生蛋白质或酶的工作过程中，由于一些特殊代谢物或化合物的积累而将其关闭，阻遏了基因的表达。比如大肠杆菌生活中必须有色氨酸，一般情况下，该操纵子是开启的。如果在细菌培养基中加入色氨酸，使之能利用培养基中的色氨酸来维持生活而不需要再费力去合成，细菌往往能在2-3 min内完全关闭该操纵子。 这就是说，某一代谢途径最终产物合成酶的基因可以被这个产物本身所关闭。这种基因被称为可阻遏基因，这些酶被称为可阻遏酶，这个现象被称为可阻遏现象，这些起阻遏作用的小分子被称为阻遏物。在这里，色氨酸或与其代谢有关的某种物质在阻遏过程(而不是诱导过程)中起作用。 7.1.4 弱化子对基因活性的影响 在这种调节方式中，起信号作用的是有特殊负载的氨基酰-tRNA的浓度，在色氨酸操纵子中就是色氨基酰-tRNA的浓度