原核调控2技术方案.pptVIP

细菌的应急反应 指细菌在恶劣生长环境中关闭tRNA和核糖体形成的能力。 1、细菌的应急反应 2、细菌的应急反应的机制 应急信号： 鸟苷四磷酸（ppGpp）、 鸟苷五磷酸（pppGpp） 诱导物：空载tRNA 焦磷酸转移酶 当细菌生长过程中，遇到氨基酸全面缺乏时，细菌将会产生一个应急反应，停止全部基因的表达。产生这一应急反应的信号是鸟苷四磷酸(ppGpp)和鸟苷五磷酸（pppGpp）。PpGpp与pppGpp的作用不只是一个或几个操纵子，而是影响一大批，所以称之为超级调控子或称为魔斑 超级调控因子或称为魔斑 习题 什么是安慰性诱导物 CAP蛋白如何作为乳糖操纵子的正调节物起作用 用含甘油的液体培养基培养大肠杆菌不能诱导乳糖操纵子。1h后在培养基中加入乳糖和再隔一段时间后加入过量的葡萄糖分别会对乳糖操纵子的表达产生什么影响？ * 第二节 操纵子学说 操纵子模型 lac操纵子的调控机理  ------ 操纵子(operon) 结构基因 启动子 操纵基因 调节基因 (promoter) (operator) 阻遏蛋白 ------ 操纵子(operon) 由操纵基因以及相邻的若干结构基因所组成的功能单位，其中结构基因转录受操纵基因所控制。 一、乳糖操纵子(lac operon)的结构与组成 调控区 阻遏基因 启动子 控制基因 结构基因 Z： β-半乳糖苷酶 Y： 透过酶 A：乙酰基转移酶 Z Y A O P DNA I lacZ编码?- 半乳糖苷酶（?-galactosidase） 将乳糖分解为葡萄糖和半乳糖 把乳糖转化为异乳糖。 lacY编码乳糖透过酶（Lactose permease） 运送乳糖过细胞质膜 lacA编码乙酰转移酶（Transacetylase） 把乙酰辅酶A上的乙酰基转移到?- 半乳糖苷上，形成乙酰半乳糖。它在乳糖降解中不起作用。 原核生物基因表达调控 ?-半乳糖苷酶 乳糖代谢 生成诱导物 葡萄糖 半乳糖 异乳糖 乳糖 → 异乳糖 二、酶的诱导-lac体系受调控的证据 在不含乳糖及β-半乳糖苷的培养基中，lac+基因型每个大肠杆菌细胞内大约只有1～2个酶分子。 如果在培养基中加入乳糖，酶的浓度很快达到细胞总蛋白量的6%或7%，每个细胞中可有超过105个酶分子。 1、实验证据 2、实验用诱导物 乳糖 IPTG(异丙基巯基半乳糖苷) TMG(巯甲基半乳糖苷) ONPG(O-硝基半乳糖苷) 安慰性诱导物 gratuitous inducer  可诱导半乳糖苷酶产生，但不是其底物 异丙基半乳糖苷（ IPTG） 巯甲基半乳糖苷（ TMG） O-硝基半乳糖苷（ ONPG） 在研究诱导作用时，很少使用乳糖 三、乳糖操纵子的调控机制： 负调控（负控制）：阻遏蛋白的调控作用 lacI P O lacZ lacY lacA lac操纵子被关闭 阻遏蛋白单体 阻遏蛋白四聚体 无诱导物时 lacI P O lacZ lacY lacA ?-半乳糖苷酶 透过酶 转乙酰基酶 无活性阻遏蛋白 诱导物 lac操纵子被诱导物开启 有诱导物时 可诱导调节 －无诱导物时 gene OFF 可诱导调节 －有诱导物时 gene ON 第一个矛盾： 诱导物需要穿过细胞膜才能与阻遏物结合，而转运诱导物需要lacY基因表达产生的透过酶；透过酶的产生又需要诱导物的诱导。 解释： 某些诱导物可以在没有透过酶的情况下穿过细胞膜进入细胞； ? 一些透过酶可以在没有诱导物的情况下合成。 ? 两个矛盾 第二个矛盾： 乳糖并不与阻遏物相结合，真正的诱导物是乳糖的异构体——异乳糖，而后者是在β-半乳糖苷酶的催化下由乳糖形成的。 解释： 一些β-半乳糖苷酶可以在没有诱导物的情况下合成。 两个矛盾 因为诱导物需要穿过细胞膜才能与阻遏物结合，而运转诱导物需要透过酶。 在非诱导状态下有少量（1-5个mRNA分子）lac mRNA合成--本底水平组成型合成。 lac操纵子的本底水平表达 本底组成型合成（background constitutive synthesis)： 在非诱导状态下有少量的lac mRNA的合成，这种合成被称之为本底水平的组成型合成。 机理： 阻遏蛋白与lacO的结合并非是经久不变的，偶而也会掉下来，RNA聚合酶就抓住这一时机进行一次转录，翻译出β-半乳糖苷酶，β-半乳糖苷透过酶，半乳糖苷转乙酰酶。 操纵子是一簇基因，其表达受阻遏蛋白与操纵区互作； lac I 基因有自己的弱启动子和终止子