微生物遗传学技术方案.pptx

基因组的精密工程—TALE核酸酶介导的基因组编辑技术TALENs的研究进展及应用;TALENs中文名是转录激活因子样效应物核酸酶，TALENs是一种可靶向特异DNA序列的酶，它借助于TAL效应子一种由植物细菌分泌的天然蛋白来识别特异性DNA碱基对。TAL效应子可被设计识别和结合所有的目的DNA序列。对TAL效应子附加一个核酸酶就生成了TALENs。TAL效应核酸酶可与DNA结合并在特异位点对DNA链进行切割，从而导入新的遗传物质。;原理;TALENs技术路线图;TALEs 结构与TALENs;Fig． 1 Structure and base sequence recognition of TALEN; 注: NLS 为核定位信号; AD 为转录激活结构域; ＲVD 为重复可变双残基 图1 将转录激活样效应因子蛋白构建成转录激活样效应因子蛋白核酸酶示意图;TALENs 基因敲除原理;注: TALENs 为转录激活因子样效应物核酸酶; Left TALENs 为识别突变位点3上游DNA 序列TALENs 质粒;Right TALENs 为识别突变位点5 下游DNA 序列TALENs 质粒;NHEJ为非同源末端连接; HR为同源重组 图2 细胞通过同源重组的方式修复示意图;TALENs 的构建方法研究;Fig． 3 DNA shuffling strategy by using type IIs restriction enzymes BsaⅠ; 我们实验室经过反复尝试，并结合已经报道的方法，总结了一套可以特异结合靶位点、实现基因组定点修饰、比较简单实用的TALENs 的构建方案( Fig． 4);基因组编辑技术在模式动物中的应用;江苏省医药动物实验基地转基因中心基于TALENS和锌酯酶ZNF技术建立了快速体细胞基因重组和小鼠敲除技术，可在3个月内获得基因敲出小鼠或是体细胞重组克隆;基因组编辑技术转染至细胞的方法;中科院，港中大PNAS基因编辑研究新成果一种快速组装基因编辑分子TALEN的方法校转基因中心对外提供锌酯酶和TALENS基因敲除服务 ;基因组编辑技术的进步;其他基因组编辑技术-转座酶、重组酶和转录因子;基因组编辑技术的临床应用;TALENs是近年来发展迅速的编辑基因; 科学家首次用TALENs技术编辑线粒体基因;TALENs清除突变的线粒体基因;2 0 12年，来自明尼苏达州罗切斯特梅奥医学中心的分子生物学家斯蒂芬·艾克尔领导的研究人员，第一次利用T A L E N s 切割斑马鱼一段基因序列中的部分DNA，并用合成D N A 取代它们。斑马??是脊椎动物生物学和人类疾病研究的一个重要的参与者。其胚胎透明、体外受精、短繁殖周期和快速生长等特点，意味着可对活体动物开展紧密的胚胎发育研究，可作为研究基因行为和功能的一种有用模型。在遗传组成上，斑马鱼与人类拥有几乎90%的相同性，因此研究它们的发育能够有助于认识人类疾病。在早期的胚胎发育阶段，这尤其如此。这项研究发表在2012年9月23日出版的英国《自然》杂志上。; 转录激活因子样效应物核酸酶主要构建能特异性识别DNA序列的核酸内切酶。该酶由两部分组成： DNA结合区域和核酸酶催化区域。激活因子样效应物主要是识别靶基因的特定DNA序列，核酸内切酶主要是打断DNA，形成双链DNA缺口，从而可在该位点进行DNA编辑修饰操作;;影响;面临的问题;展望;Thank You !