基因组改组技术简介概述.ppt

微生物实验室 2012年7月27日 微生物育种方法比较 诱变：工作量大，效率低，不能定向育种。 基因工程育种：能实现定向育种，能生产外源蛋白；但是由于次级代谢产物是由微生物细胞内的多酶体系催化完成，多酶体系中的各个酶由分散或连锁的结构基因编码，至今人们仍不能清除了解大多数次级代谢产物合成基因的性质。因此目前对抗生素产生菌的基因改造，绝大多数仍难以完成。 基因组改组：融合了前2种方法的优点。 基因组改组发展简史 1994年,Stemmer 首先提出了在体外定向进化分子的方法-- DNA shuffling 技术。其方法是 将同源的DNA 用DNAaseI 进行消化成片段, 然后将得到的随机片段无引物PCR,使之重新随机装配, 从而获得了多种排列组合的突变基因库, 最后利用设计好的引物PCR, 得到预期的重组体。 A-B-C-D-E-F-G A-D-B-G-C-F-E 1998年，Stemmer 等又提出了genomeshuffling ( 全基因组改组),该种方法首先选择一个原始亲株,通过经典的诱变育种方法获得多个表型得到提高的菌株, 构建突变候选株文库, 以这些表型提高的菌株作为首轮多亲本融合的直接亲株, 然后进行多亲株融合,使其全基因组进行随机重组, 获得第一代融合株;再从中选择表型获得进一步提高