现代的生物和技术详解.ppt

* 通常在基因工程中选作载体的有：①质粒——环状双链小型 DNA 分子，种类甚多，有的可在细菌细胞内独立复制，有的亦可用于动、植物细胞。　例如：根瘤土壤杆菌所携带的 Ti 质粒常用作植物细胞基因工程的载体。人工改造的质粒常用的有pBR322天然质粒，派生质粒pmB1，psC101等②噬菌体——常用的是λ噬菌体。经构建后，常用于细菌细胞。常见的有Mu噬菌体载体。③病毒——例如猿猴空泡病毒 SV40 常用作动物细胞基因工程的载体。?④粘粒（cosmid,装配性质粒），由质粒和Mu噬菌体的cos位点u或膜等构建而成的一种大容量克隆载体。 * 含有目的基因的DNA片段和载体DNA连接技术即DNA重组技术，其核心步骤是DNA片段之间的体外连接，其本质是涉及限制酶，连接酶等酶促反应过程。载体为细菌中的质粒，温和噬菌体。这中间最为重要的是两大类酶：①DNA 限制性内切酶：把载体DNA片段切开。②DNA 连接酶：用于连接载体和外源DNA片段。此外，在构建 DNA 重组分子中使用的工具酶还有：DNA 聚合酶、逆转录酶、DNA 修饰酶、RNA 修饰酶、核酸外切酶、碱性磷酸酶等。 用与提取目的基因相同的限制酶切割质粒使之出现一个切口，将目的基因插入切口处，让目的基因的黏性末端与切口上的黏性末端互补配对后，在连拉酶的作用下连接形成重组DNA分子 * 基因工程中常用的受体细胞有大肠杆菌、