分子生物学课件MB-6 转录后加工.ppt

* 它的结构中戊糖的C-1不是与尿嘧啶的N-1相连接，而是与尿嘧啶C-5相连接 * 真核生物rRNA前体比原核生物大，哺乳动物的初级转录产物为45s，低等真核生物的rRNA前体为38s，真核生物5sRNA前体独立于其他三种rRNA的基因转录。 真核生物rRNA前体的加工 真核生物rRNA前体中含有插入顺序，rRNA前体要形成成熟的rRNA，需要经过拼接反应。例如，四膜虫的rRNA前体的拼接是一种无酶催化的自动拼接过程。四膜虫基因组内，26srRNA编码的区域内有413bp的插入顺序。该插放序列可以不消耗能量从rRNA前体中被除掉。用SDS煮沸和用蛋白酶外理等破坏酶活性办法，都不能破坏拼接活性，但反应中Mg2+和鸟嘌呤核苷酸是必在的。用32P-GTP进行追踪实验表明，起始过程是GTP在插入顺序5’端发生亲核反应，同时GMP与5’端切点的切除段形成磷酸二酯键并使原RNA断开。第二步是5’切点的外元3’-OH与3’切点的外元5’-P共价连接，获得成熟的rRNA，被切除部分最后环化，形成一个环状结构，同时从5’端去掉一个15核苷酸啐片。剩余部分连接成399核苷酸的环状产物，再经过几步，最后切下一个19个核苷酸的线性内含子序列即L-19，它具有催化活性，上面的剪接作用，是由内含子本身的催化性质决定的 。 * 将初级转录产物的5’-pppG···水解成5’-ppG···或5’-pG···。 在5’-起始部与另一 ppp G反应生成GpppG（三磷酸双鸟苷）。 在甲基化酶作用下第一位 G 甲基化生成m7GpppG···。第二位核苷酸的2’位也可甲基化成 m7GpppGm ···。 * 保护mRNA5’端不被降解 细胞内存在许多RNA酶（RNase），它们可攻击游离的RNA分子。 RNA酶的降解从5‘端起始， 当在mRNA的5’端加上m7GpppG帽子后，带有3个连接磷酸的5‘帽可阻止RNase切割 为核糖体识别mRNA提供信号，提高翻译效率 真核生物mRNA必须通过5‘帽结合蛋白才能接触核糖体，起始翻译。缺少加帽的mRNA由于不能被5’帽结合蛋白识别，其翻译效率比加帽的mRNA低二十倍。 * 凡由Pol II转录的RNA均在5端加帽，包括snRNA，这是RNA分子进出细胞核的识别标记。大多数snRNA转录后在细胞核中接收5端单甲基m7G加帽，然后转移到细胞质与snRNP蛋白结合。在细胞质中snRNA 5帽需再修饰成为三甲基带帽结构m2，2，7G，随后重新返回细胞核参与mRNA的剪接加工。U6 snRNA由PolII转录，在其5端保留的三磷酸基团无帽子结构，因而不能输出细胞核。某些突变型中被输送到细胞质中的snRNA由于不能合成三甲基带帽结构，不能返回细胞核。 * 几乎所有真核生物成熟的mRNA末端都有一串约250个腺嘌呤核苷酸尾巴。它们并非模板DNA编码，而是在转录完成后由poly (A) 多聚酶合成。加尾位置不在转录物的最末端，而是在接近末端的内部位点。在切除mRNA 3末端的一段序列后，再加上多聚腺苷酸。 真核生物mRNA poly (A)长度并非固定不变。细胞核中的poly (A)长度平均为210±20 nt，细胞质poly (A )长度190±20 nt。输送到细胞质中的mRNA其poly (A)可由RNase切短，但又能经细胞质poly（A）酶重新加长，保持有限的长度。细胞质中mRNA的poly (A)长度总的趋势是逐渐变短，直到丢失大部分或全部poly（A），此时mRNA的寿命亦接近终点。 * 参与Poly(A)加尾的蛋白质称为切割与多聚腺苷酸化专性因子（cleavage and polyadenylation specificity factor, CPSF），CPSF专一性与加尾信号5?AAUAAA?3结合。另一个蛋白即切割激发因子CstF（cleavage stimulation factor, CstF）特异附着在富GU区。因此CPSF和CstF实际结合的位置处于切割与多聚腺苷酸化位点两侧。CPSF或CstF单个因子与信号顺序结合都是不稳定的，只有两者同时附着在两个信号位置才保持稳定状态。此外还有另两个蛋白对RNA的切割必不可少，它们分别是切割因子I和II（cleavage factors I and II， CFI和CFII），可与RNA结合。poly（A）多聚酶，CFI和CFII与RNA结合的位置处于两个加尾信号之间。虽然切割与加尾是两个性质不同的事件，但实际进行时几乎同时发生，实验设计很难将其分开。 * 细胞质中mRNA的poly (A)长度总的趋势是逐渐变短，直到丢失大部分或全部poly（A），此时mRNA的寿命亦接近终点。 mRNA的翻译需要PAB I（poly（A） bind