RAGE与肺动脉高压技术分析.docxVIP

晚期糖基化终末产物受体在肺动脉高压形成中的重要作用 背景： 肺动脉高压是一种以促进肺动脉血管平滑肌细胞增殖并抑制其凋亡为特点的血管病变。这种病变使肺动脉压和肺血管的阻力增高。最近调查已经表明了信号转导与转录激活因子（STAT3）/骨形成蛋白2型受体（BMPR2）/ 过氧化酶增殖因子活化受体（PPARy）/在肺动脉高压中的影响。STAT3激活导致BMPR2下调，并减少PPARy，这有助于在PAH中出现细胞增殖及抑制细胞凋亡。在软骨细胞中，这条轴的激活已经被证实其归功于RAGE，由于RAGE在PAH的病人中是最好的上调蛋白之一并且具有强大的STAT3催化剂，因此，我们假定这是通过激活STAT3，RAGE诱导BMPR2和PPARy的下调，促进肺动脉高压-肺动脉血管平滑肌（PAH-PASMC）的增殖和抑制其凋亡而实现。 方法与结果 实验组在试管内，分别取PAH病人和健康人的PASMc，我们观察的到RAGE在PAH-PASMC过度表达（增高6倍），包括STAT3的激活（阳性细胞从10%增加到40%）和BMPR2与PPARy水平 的降低（减少超过50%）。在体内建立PAH模型（用S100A4 recapitulates）：通过控制细胞内的RAGE药理活性（即增加RAGE到6倍，包括激活STAT3并减低BMPR3和PPARy。）在以上两种情形下，这种表型的功能都因RAGE的抑制而被翻转。在试管内，通过抑制在野百合碱（MCT）和Sugen诱导的PAH的RAGE后，观察到以肺动脉压和右心室肥厚减轻为特点的效应。（对照组大鼠平均动脉压设置在15mmhg作用，PAH模型组设置在平均动脉压超过40mmhg,然后将RAGE抑制，结果用MCT和Sugen处理后的两种模型大的大鼠平均动脉压分别降低至20和28mmhg）。这与改善肺灌注压和血管重建导致的细胞增殖受抑制（抑制超过50%）和BMPR2/PPARy轴的恢复有密切联系。 结论：我们证实了RAGE在PAH形成过程中的作用。由此，提出RAGE构成了一种治疗PAH新的，具有应用前景的作用靶点。 结果1：晚期糖基化终末产物受体（RAGE）增加并激活了在体肺动脉高压（PAH） A, RAGE expression measured by quantitative reverse-transcription polymerase chain reaction (qRT-PCR) normalized to 18S is significantly increased in both whole lung tissue (n=8 patients per group) and in PA smooth-muscle cells (PASMCs) isolated from PAH patients compared with controls. This was confirmed by immunoblots showing a 6-fold increase in PAH-PASMCs compared with controls (n=3 PAH and n=5 control cell lines, P0.01). 通过逆转录聚合酶链反应的定量检测，RAGE在肺动脉高压（PAH）患者的在体的整个肺组织和离体的肺动脉平滑肌细胞（PASMCs）的表达均增高。 RAGE的表达与PAH严重程度的关系: 通过免疫荧光测定，RAGE蛋白在终末肺动脉平滑肌细胞中的表达与PAH患者的严重程度呈密切的相关性。 注：DAPI(4,6-二脒基-2-苯基吲哚)是一种能够与DNA强力结合的荧光材料。 除了肺部以外，RAGE在其他器官及组织没有明显增高。 图2：RAGE的表达可以被改变 A, Control PASMCs treated with S100A4 had a significant increase in RAGE expression measured by immunoblot (n=3 to 5 cell lines per group, P0.05). It is also shown that scrambled siRNA (negative control, siSCRM) transfection had no additional effect on PAH-PASMCs. 通过免疫印迹法定量检测我们发现：对照组中加入了S100A4蛋白之后RAGE 的表达明显上升，与PAH患者的肺动脉平滑肌细胞内 RAGE表达相当，而在此基础上加入了siRAGE之后RAGE的表达显著下降，同时也发发现在转染了干扰siRNA(siSCRM)之后的PAH-PASMCs其RAGE的表达没有明显变化。而加入了siRAGE之后