项目3：革兰染色法解决方案.doc

项目3：革兰染色法 【目的要求】】 染色方法有单染法和复染法。前者应用一种染料使细菌着色，用以观察细菌的大小、形态和排列；后者用两种或两种以上的染料，有助于鉴别细菌，故又称鉴别细菌染色法。革兰染色法为最常用的染色法。 一、细菌涂片的制作 要进行细菌染色，首先需制作细菌涂片，制片的一般过程分涂片、干燥和固定三个步骤。 【材 料】 【方 法】 1 2．干燥：涂片置室温自然干燥，也可在酒精灯弱火处略烘使干，切勿用高温烘烤。 3．固定：将干燥的涂片面向上在酒精灯火焰上来回通过三次，直至手背试触涂片反面略有烫感为限。固定的目的是杀死细菌并使菌体与玻片粘附较牢，以免染色时被染料和水冲掉。 二、革兰（Gram）染色法 革兰氏染色法(Gram’s stain)是最常用的细菌染色法，本实验要求同学能正确掌握此染色方法的操作技术，理解其在鉴别细菌上的重要意义。 【原理】 G+）细胞壁肽聚糖层数多，且肽聚糖为空间网状结构，再经乙醇脱水，网状结构更为致密，染料复合物不易从细胞内漏出，仍为蓝色。而革兰氏染色阴性菌（G—）细胞壁脂类含量多，肽聚糖层数少，且肽聚糖为平面片层结构，易被乙醇溶解，使细胞壁通透性增高，结合的染料复合物容易泄漏，细菌被脱色为无色，再经石炭酸复红稀释液复染成红色。 【材料】 24h斜面培养物 ② 大肠埃希菌24h肉汤培养物 ③ 革兰氏染色液：结晶紫染液、碘液、