基因工程的酶学基础 基因工程课件.ppt

用途： 1. 催化[α-32P]-3’-脱氧核苷酸标记DNA片断的3’ 末端。可用于测序的终止，一位不含游离的3’-OH末端。 2. 催化非放射性的标记物掺入到DNA片断的3’-末端： 生物素等，掺入后可产生荧光染料或抗生物素蛋白结合物的接受位点。 3. 用于在平头ＤＮＡ上合成一段寡聚核苷酸，从而形成粘性末端。 碱性磷酸酶： 来自于大肠杆菌（bacterial alkaline phosphatase BAP）或小牛肠（calf intestinal alkaline phosphatase CIP），该酶用于脱去DNA（RNA）5’末端的磷酸根，使5’-P成为5’-OH，该过程称核酸分子的脱磷酸作用。当需要5’端同位素标记或为了避免DNA片段自身连接（或环化）时可进行脱磷酸反应。 S1核酸酶： 来自于稻谷曲霉，该酶只水解单链DNA，用于将粘性末端水解成平末端及cDNA发夹式结构的处理。 反转录酶（reverse transcriptase）  这类酶来自于反转录病毒，它可以RNA为模板，催化合成ＤＮＡ。目前常用的有禽源（AMV）及鼠源（M-MLV）反转录酶两种。 体外连接的三种方式： 1. 用ＤＮＡ连接酶连接具有互补粘性末端的DNA片断 2. 用Ｔ４ＤＮＡ连接酶将平末端的DNA片断连接；或是用末端