技术基础 20世纪60年代末70年代初,限制性内切酶和DNA连接酶等的发现,使DNA分子进行体外切割和连接成为可能。 70年代中期,DNA分子的核苷酸序列分析技术问世。 这两项技术,使DNA的结构分析问题得到了根本的解决。 1972年首次构建了一个重组DNA分子,并提出了体外重组的DNA分子进入宿主细胞的过程,以及在其中进行复制和有效表达等问题。 在60年代还发展出了琼脂糖凝胶电泳和Southern转移杂交技术,这对于DNA片断的分离、检测十分有用,并很快被应用于基因操作实验。 基因工程的问世 1973年Cohen等首次完成了重组质粒DNA对大肠杆菌的转化,同时与S.Boyer合作,将非洲爪蟾含核糖体基因的DNA片段与质粒pSC101重组,转化大肠杆菌,转录出相应的mRNA。此研究成果表明基因工程已正式问世;并说明了质粒分子可以作为基因克隆的载体能携带外源基因导入宿主细胞,也说明了真核生物的基因可以转移到原核生物细胞中并在其中实现功能表达。 基因工程的迅速发展阶段 自基因工程问世以的这二十几年是基因工程迅速发展的阶段。如果说20世纪八九十年代是基因工程基础研究趋向成熟,那么二十一世纪初将是基因工程应用研究的鼎盛时期。 基因工程研究的主要内容或步骤 从复杂的生物有机体基因组中,经过酶切消化或PCR扩增等步骤,分离出带有目的基因的
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