--组化抗原抗体2.ppt

免疫组织化学技术 (immunohistochemistry technique ) IHCT 免疫组织化学是根据抗原与抗体特异性结合的原理，以细胞中特异成分为抗原，用标记的抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应，对相应抗原及其抗体进行定性、定位、定量测定的一种免疫检测技术方法。 概 述 基本原理： 抗原抗体反应 与IHCT相关的免疫学基础： 抗原：能刺激机体引起抗体的产生，并与相应抗体发生特异性结合的物质—抗体原。 抗体：针对某种抗原而产生的，并能识别相应抗原，与其发生特异性结合 2.化学组成和结构 复杂 蛋白质：大分子，免疫原性强。 多糖：细菌荚膜多糖有免疫原性。 核酸：免疫原性弱 核蛋白：有免疫原性。 类脂：无免疫原性 大多数蛋白质抗原可有多个抗原决定簇,但由于空间位阻作用,在同一时间内仅有部分抗原决定簇暴露和相应的抗体结合。 共同抗原表位与交叉反应 抗原的种类 有关概念 免疫球蛋白:是浆细胞产生的球蛋白。 １、抗体（antibodies, Ab）：是机体免疫细胞受抗原物质刺激后产生的，能与相应抗原特异性结合，并具有多种免疫学、生物学活性的球蛋白。 2、免疫球蛋白（immunoglobulins,Ig）：指具有抗体活性或化学结构与抗体相似的球蛋白。 可变区（variable regions,V区） 　　位于免疫球蛋白多肽链的N端，占轻链的1/2与重链的1/4。 　　该区的氨基酸组成及排列顺序随抗体特异性不同而发生变化。 它赋予抗体以特异性。 恒定区（constant regions,C区） 　　位于免疫球蛋白多肽链的N端，占轻链的1/2与重链的3/4。 其氨基酸组成及排列顺序都比较恒定。 免疫球蛋白水解片段 1.木瓜蛋白酶（Papain） ? IgG Fab段(fragment of antigen- binding,抗原结合 片段) Fc段（fragment crystalizable,可结晶片段） 2.胃蛋白酶（Pepsin）? IgG F( ab′)2 pFc ′ 3.意义：阐明Ig分子生物学作用； 构建基因工程抗体。 抗体是免疫组织化学技术的最关键试剂与 示踪工具。 按制备方法分类： 1、多克隆抗体(polyclonal antibody, PcAb) 2、单克隆抗体(monoclonal antibody, McAb) 3、基因工程抗体(genetic engineering antibody)。 3、基因工程抗体又称重组抗体 是指应用NDA重组及蛋白工程技术对编码抗体的基因按不同的需要进行改造和装配，经导入适当的受体细胞后重新表达的抗体。 抗体的类型 技术应用类型： 1、特异性抗体（一级抗体） 2、抗抗体 （二级抗体） 3、标记抗体 抗体的购置及注意事项 1.抗体的购置 目前商品化抗体已有上千种，一种抗体可以有数家公司生产，其质量的好坏也存在很大差异，首先应选择一家好的生产公司，根据文献提供的信息，选择所需试剂的型号。 2.购置抗体的注意事项 (1)种属：单克隆抗体，多克隆抗体  (2)能否用于石蜡切片 (3)稀释度 (4)特异性，交叉反应 (5)用何种组织前处理形式 (6)包装单位，价格 第三节 抗原抗体反应 抗原与相应抗体之间的特异性结合反应。 抗原抗体反应原理 抗原抗体反应的特点 抗原抗体反应影响因素 受体( receptor) 　　受体在细胞生物学中是一个很泛的概念,意指任何能够同激素、神经递质、药物或细胞内的信号分子结合并能引起细胞功能变化的生物大分子,存在于细胞膜、胞浆或细胞核内。 不同的受体有特异的结构和构型。　 受体与配体结合的特异性是受体的最基本特点，保证了信号传导的正确性。 配体和受体的结合是一种分子识别过程，它依靠氢键、离子键与范德华力的作用使两者结合，配体和受体分子空间结构的互补性是特异性结合的主要因素。 考查题： 根据课题写出应用免疫组化技术部分实验计划（2000字）。 具体内容包括：1-5部分 1、题目：应突出实验目的