植物表达载体构建讲义.pptVIP

植物表达载体构建 张玉刚 zyg4458@163.com 载体 vector 表达载体(expressing vector) 特点：带表达构件—转录和翻译所需的DNA序列 大肠杆菌表达载体：含启动子—核糖体结合位点—克隆位点—转录终止信号 启动子：trp-lac(tac)启动子、λ噬菌体PL启动子、T7噬菌体启动子 核糖体结合位点(ribosome-binding site,RBS)：起始密码子(ATG)和SD序列 转录终止序列 启动子的种类 组成型启动子 诱导型启动子 组织特异型启动子 在某些情况下，一种类型的启动子往往兼有其它类型启动子的特性 Constitutive promoter 在该类型启动子控制下，结构基因的表达大体恒定在一定水平下，在不同组织部位表达水平没有明显差异。 特点：表达具持续性；tRNA和蛋白质表达量相对恒定；它们不表现时空特异性；不受外界因素的诱导；从结构上看，大多数组成型启动子转录起始位点上游几百个核苷酸处，存在有六聚体花纹（hexamer motifs)序列TGACTG。 它们以重复形式出现并被6-8个核苷酸隔开，缺失及点突变分析表明六聚体花纹的存在对维持启动子的转录活性是必要的。 CaMV 35S启动子 来自花椰菜花叶病毒，由于启动整个CaMV基因组的一小段重叠序列转录产物的沉降系数为35S，故将编码该转录产物的启动子称之为35