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蛋白纯化答疑 By? aqiao 发表于 2007-4-15 18:38:00? 凝胶过滤层析 也叫做分子排阻层析。一种利用带孔凝胶珠作基质，按照分子大小分离蛋白质或其它分子混合物的层析技术。 关键是不知道你用什么凝胶过滤层析。一般来说大部分细菌比蛋白质小，要看是什么的凝胶过滤层析，才能达到材料上的阻挡。 响凝胶过滤层析的多种因素 很多人以为凝胶过滤非常简单直接，无需花太多精神仔细优化。其实影响凝胶过滤的参数非常多，现与大家分享几点经验： 1 层析柱必须有柱头及分布器，即adaptor，紧压胶面完合没有空隙，否则样品上样受影响。 2 凝胶悬浮液不可太稠，否则很容易出气泡；太稀装柱时间过长，亦影响效果。50- 70%较适合。若是干粉，溶胀时间必须充足。装前完全搅匀。 3 一次性倒入层析柱中，容量不够则需加装柱器。切不可分几次倒，柱效和对称性都很难合格。 4 装柱及层析工作所用缓冲液的温度需一样。 5 柱底网下的气泡一定要除掉，可先用20%乙醇湿一下底网。 6 每种胶在不同柱高下的装柱流速、压力都不一样。跟足介质说明书的指引就万无一失了！找不到查AKTA系统的 Unicorn 中主屏幕的 adviser 即可，也可以查这光盘上有关层析凝胶的操作手册。 7 上样前柱平衡非常重要，不光UV平稳，至少平衡一个柱体积。 8 缓冲液pH值会影响分离