重组痘病毒重点.docVIP

痘病毒（MVA）的扩增 TCID50测定 铺96孔板，每孔100μl，约1×103 -5×103个细胞； 将病毒作一系列稀释 取150μl病毒液，加入1350μl 2%维持液，即稀释度为10-1 再从上一稀释液中取150μl，加1350μl 维持液，即为10-2 以此类推， 10-6 每孔各加100μl病毒稀释液，总体积为200μl，其中，1，2两孔只加2%维持液； 37℃培养5天左右，每日观察CPE； 计算 稀释度 10-1 A 100 10-2 B 100 10-3 C 91.6 10-4 D 40 10-5 E 0.7 10-6 F 0 Reed-Muench两氏法 距离比例=（高于50%病变率的百分数-50%）/ （高于50%的百分数-低于50%的百分数） Eg.=（91.6-50）/（91.6-40）=0.8 Lg TCID50=距离比例×稀释倍数的对数+高于50%病变率的稀释度的对数=0.8×（-1）+（-3）=-3.8 TCID50=10-3.8 /0.1ml 含义：将该病毒稀释103.8接种100μl可使50%的细胞发生