基因克隆考试预测题重点分析.doc

一、请任意列举不少于三个基因克隆技术在生物学与医学中的应用，并且解释原理。 1、蛋白定位 将抗体制作为探针，加荧光标记后将抗体注入细胞，进行放射自显影，从而定位蛋白质。 2、启动子活性研究 一种带有某些标记可供筛选的载体，如载体上面有β-半乳糖苷酶基因的载体，将载体上原本的启动子替换为你认为有启动子活性的序列，构建重组载体，检测β-半乳糖苷酶表达活性来判断目的序列的启动活性。真核上面一般用荧光素酶报告载体，用表达的荧光素酶多少与底物发光的强弱来判断目的序列的启动活性。 （1）蛋白定位。启动子—要研究蛋白—GFP—蛋白定位 （2）基因敲除小鼠。通过外源DNA与染色体之间的同源重组，进行精确地定点修饰和基因改造。 （3）基因疗法。利用健康的基因来填补或替代基因疾病中某些缺失或病变的基因。 二、请描述基础基因克隆技术的大体步骤，并且描述PCR过程中可能发生的问题，以及简单的应对方法 1、找：找到DNA片段。利用生物信息学、NCBI数据库、BLAST查找基因。 2、拉：PCR扩增。 3、剪：酶剪切 4、连：DNA连接 5、转：转化 PCR结果产生非特异性扩增，解决方法是在PCR中先将模版同引物在高于两者变性温度的条件下处理一段时间，然后将酶和其他成分加入扩增，用以消除非特异性产物的方式，即Hot Start PCR 三、1. 一个学生想试图克隆一段DNA片段到一个载体DNA上，请帮助这个学