细菌与酵母表面展示技术课件.pptVIP

细菌表面展示技术酵母表面展示技术第七组 定义：细菌表面展示技术是利用基因工程手段将某一蛋白或短肽段（靶蛋白）与微生物外膜蛋白（载体蛋白）以融合蛋白的形式呈现在细胞表面。 外源蛋白与载体蛋白结合方式 C端融合 (N端锚定在外膜) N端融合 (C端锚定在外膜) 夹心融合(有些蛋白本身具有信号肽序列及锚定于外膜的序列，内部合适位点插 入外源蛋白) 细菌表面展示系统 传统：细菌的外膜蛋白、脂蛋白、表面附属结构亚单位（如菌毛、鞭毛等） 近年：冰晶核蛋白、自体运转蛋白、S2层蛋白等 每种展示系统都有自身的缺点（如展示蛋白大小的限制、错误定位、形成包涵体、外膜不稳定等），因此需要开发新的系统，以进一步优化表面展示系统。 早期研究多集中在革兰氏阴性菌。原因是遗传背景清楚，便于控制蛋白展示。 但是从应用上来看，革兰氏阳性菌的某些特性更适合于表面展示。 如下表： 缺点：转化率低，限制构建较大容量的肽库；一些革兰氏阳性菌分泌大量蛋白酶，这会给应用带来麻烦。 细菌表面展示技术，结合荧光激活细胞筛选仪或流式细胞筛选仪，是非常有效的高通量筛选方法。 优点： 1、 能够决定突变体库中每个克隆的功能特性。 2、目前唯一能够定量检验单细胞水平和大量突变体催化活性的方法。 3、定量分析酶活性 4、同时检测多个参数并且对每个观察到的克隆进行记录。 与噬菌体相比：细菌表面展示技术在疫