生化鉴定类实验创新.docVIP

生化鉴定类实验 此类实验是利用物质的一些特性来鉴定该物质，因此物质的特性及常用的鉴定方法必须牢牢掌握。高巾生物学教材中相关的实验有：①生物组织中还原糖、脂肪、蛋白质的鉴定；②叶绿体中色素的提取和分离；③DNA的粗提取与鉴定。 中学阶段，最常用的提取、分离方法是利用各种物质溶解度的差异进行盐析或层析；最常用的鉴别（定）方法是利用各种物质特定的显色反应，此法应严格控制样品的量，和排除其他有关物质的干扰，最常用的定量方法是滴定法和比色法。 －、实验：生物组织中还原糖、脂肪、蛋白质的鉴定 1．实验原理：某些化学试剂能够使生物组织中的有关化合物，产生特定的颜色反应。 　还原糖＋斐林试剂→砖红色沉淀 脂肪＋苏丹Ⅲ染液→橘黄色 显色反应　　脂肪＋苏丹Ⅳ染液→红色 蛋白质十双缩脲试剂→紫色反应 2．方法步骤： 还原糖的鉴定：选材→制备组织样液→鉴定样液。 脂肪的鉴定：选材→切片制作→染色→镜检鉴定。 蛋白质的鉴定：选材→制备样液→鉴定样液。 3．注意事项： （1）本实验成功与否的关键在于实验材料的选择，为提高实验效果，应根据当地实际情况，精心选择含糖量较高，富含脂肪、蛋白质的生物组织或器官作为实验材料。选好实验材料，实验则成功了一半。 （2）用于鉴定还原糖的生物组织，最好选含糖量较高，而组织颜色较浅，或近于白色的，如苹果和梨的果实。经试验比较，颜色反应的明显程度，依次为苹果、梨、白色甘蓝叶、白萝卜。 （3）用于鉴定脂肪的实验材料最好选择富含脂肪的种子，如花生种子取其子叶，供实验用的花生种子必须提前浸泡3～4h（以宜于制作临时装片为准）。浸泡时间短了不容易成切片；浸泡时间过长，则组织太软，切下的薄片不易成形。 （4）用于鉴定蛋白质的植物材料，应提前浸泡1～2d，便于研磨。 （5）斐林试剂极不稳定，其甲液和乙液需分别配制、储存，使用时再临时混合均匀用于实验。 （6）双缩脲试剂的使用，应先加试剂A，造成碱性环境，再加试剂B。 （7）在可溶性糖的鉴定中，对试管中的溶液加热时，试管底部不要触及烧杯底部；试管口不要朝向实验者，以免溶液沸腾时冲出试管造成烫伤。 （8）蛋白质的鉴定如果是用稀释液，浓度不能太大，以免实验后粘住试管壁，不易洗净。 【例1】下列关于实验操作步骤的叙述中，正确的是 A．用于鉴定可溶性还原糖的斐林试剂甲液和乙液，可直接用于蛋白质的鉴定 B．脂肪的鉴定需要用显微镜才能看到被染成橘黄色的脂肪滴 C．鉴定可溶性还原糖，要加入斐林试剂甲液摇匀后，再加入乙液 D．用于鉴定蛋白质的双缩脲试剂A液与B液要混合均匀后，再加入含样品的试管中，且必须现混现用 ［解析］本题在于考查学生的操作是否规范、正确，是否注意了不同鉴定实验之间的差别。斐林试剂与双缩脲试剂所用漆质相同，且所用氢氧化钠溶液的浓度相同，但二者所用的硫酸铜的质量浓度不同。鉴定可溶性还原糖时，是甲、乙液现混现用，一次加入。而鉴定蛋白质时要先加A液，再加B液。还原糖、蛋白质的颜色反应走试剂与其发生化学反应的结果，足肉眼可见的。脂肪的鉴定中，由于脂肪滴小且分散在细胞中，所以需要借助于显微镜观察。 ［答案］B ［变式1］将面包围包在纱布中在清水中搓洗，鉴定黏留在纱布上的黏稠物质和洗出的白浆用的试剂分别是 A．碘液、苏丹Ⅲ溶液B．双缩脲试剂、碘液 C．斐林试剂、苏丹Ⅲ溶液 D．碘液、斐林试剂 二、实验：叶绿体中色素的提取和分离 1．实验原理：叶绿体色素能溶解在有机溶剂中，如丙酮；叶绿体色素在层析液中的溶解度不同，随层析液在滤纸上扩散的速度也不同。 2．方法步骤：提取色素→制滤纸条→滤液画线→纸上层析→观察结果。 3．注意事项： （1）要选取新鲜色深的叶片作实验材料，以便使色素液中含有较多的色素。 （2）研磨时一定要快速充分。 （3）过滤时要用脱脂棉（或单层尼龙纱布），不能用滤纸。 （4）滤液细线画得要细而直，否则，在层析时会导致色素带的重叠。要把滤液细线画细画直。应该做到：毛细吸管的管口要细要齐，画线时，速度要快且均匀。 （5）画滤液细线时，要重复画2～3次，以便提高色素细线中色素的含量。 （6）层析时不能让滤液细线接触到层析液，因为色素容易溶解于层析液中，导致色素带不清晰。 【例2】下列为“叶绿体色素提取和分离”实验： （1）在“叶绿体色素的提取和分离实验”中，将叶绿体色素进行分离的方法名称是　　　　 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 （2）某学生在实验过程中将画有滤液细线的滤纸条（已重复几次画线）浸入层折液中，几分钟后取出观察，发现在滤纸条上无色素分带现象，而其他用同一滤液做实验的同学的滤纸条上却色素分带明显。其实验失败的原因可能是 　　　　　　　　　　。 （3）观察叶绿体色素的荧光现象，可将盛有叶绿体色