原创力文档- 1、原创力文档（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。。
- 2、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击 这里二次下载。
- 3、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。
查看更多
1、目的
依据GB/T18204.10—2000游泳池水微生物检验方法大肠菌群测定，熟练掌握此规程，保证检验结果的准确性。
2、适用范围
本标准规定了游泳池水大肠菌群的测定方法。
3、责任
使操作者熟悉本规程，并在具体样品检验中严格遵照操作，确保检测结果准确性。
4、内容：
4.1定义：大肠菌群
指一群在36℃±1℃培养24h能发酵乳糖、产酸、产气的需氧和兼性厌痒的革兰氏阴性无芽胞杆菌。
第一法 多管发酵法
4.2 仪器：
高压蒸汽灭菌器。
干热灭菌箱。
培养箱：36℃±1℃。
冰箱。
电炉。
天平。
灭菌平皿：直径9cm.
灭菌刻度吸管：1mL,10mL
灭菌棉拭子。
灭菌剪刀。
放大镜。
PH计或精密PH试纸。
4.3 培养基和试剂：
4.3.1乳糖胆盐发酵培养液
4.3.1.1成分： 蛋白胨 20g
牛肉膏 3g
乳糖 5g
氯化钠 5g
1.6%（v/v）溴甲酚紫乙醇溶液 1ml
蒸馏水 1000ml
三倍浓缩乳糖蛋白胨培养液按上述乳糖蛋白胨培养液浓缩三倍配制。
4.3.1.2制法：将蛋白胨、牛肉膏、乳糖及氯化钠置于1000ml蒸馏水中加热溶解，调pH值至7.2～7.4，再加入1ml 1.6%溴甲酚指示剂，充分混匀，分装到含有带有倒管的试管中，在115℃高压灭菌15分钟。
4.3.2伊红美兰琼脂
4.3.2.1成分： 蛋白胨 10g
乳糖 10g
磷酸氢二钾 2g
琼脂 17g
2%伊红水溶液 20ml
0.65%美蓝溶液 10ml
蒸馏水 1000ml
4.3.2.2制法：将蛋白胨、磷酸盐和琼脂溶解于蒸馏水中，调pH值至7.1，分装到烧瓶内。121℃高压灭菌15分钟备用，临用时加入乳糖并加热溶化琼脂，冷至50～55℃，加入伊红和美篮溶液，摇匀，倾注平板。
4.3.3革兰氏染色液
4.3.3.1结晶紫染色液：
结晶紫 1g
95%乙醇 20ml
1%草酸铵水溶液 80ml
将结晶紫溶于乙醇中，然后与草酸铵溶液混合。
4.3.3.2革兰氏碘液：
碘 1g
碘化钾 2g
蒸馏水 300ml
将碘与碘化钾先进行混合，加入蒸馏水少许，充分振摇，待完全溶解后，再加蒸馏水至300ml。
4.3.3.3脱色液： 95%乙醇
4.3.3.4沙黄复染液：
沙黄 0.25g
95%乙醇 10ml
蒸馏水 90ml
将沙黄溶解于乙醇中，然后用蒸馏水稀释。
4.3.4染色法
4.3.4.1将涂片在火焰上固定，滴加结晶紫染色液，染色1分钟，水洗。
4.3.4.2滴加革兰氏碘液，作用1分钟，水洗。
4.3.4.3滴加95%乙醇脱色，约30秒，水洗。
4.3.4.4滴加复染液，复染1分钟，水洗，待干，镜检。
4.3.5染色结果：革兰氏阳性菌呈紫色，革兰氏阴性菌呈红色。
4.4 推测性试验
4.4.1在两个装有50ml三倍浓缩乳糖胆碱培养液的大试管或烧杯内各加入水样100ml。
4.4.2在10支装有5ml三倍浓缩乳糖胆碱培养液的试管里各加入水样10ml。
4.4.3轻摇试管，使液体充分混匀，置36℃±1℃培养箱中，培养24h。
4.4.4
文档评论（0）