仪器分析课件4.5 与4.6节.ppt

第四章高效液相色谱法和超临界流体色谱法 4.5.1 一般条件选择 4.5.2 分离类型的选择 4.5.3 流动相的选择 第六节HPLC的应用 4.6.1 高效液相色谱的分析应用 4.6.2 制备型液相色谱 4.5.1 一般条件的选择 2.流速 4.5.2 分离类型选择 4.5.3 流动相的选择 多元混合溶剂的溶剂极性参数计算 多元混合溶剂的溶剂极性参数计算 溶剂的选择性 溶剂的选择性 4.6 HPLC的应用 2. 稠环芳烃的分析 3. 血浆分析 4.6.2 制备型液相色谱 2. 液相制备色谱的方法 3. 制备型液相色谱 请选择内容 第五节液相色谱分析条件的选择 choice of analytical condition for HPLC High performance liquid chromatography and Supercritical fluid chromatography 1. 影响分离的因素与提高柱效的途径 液体的扩散系数仅为气体的万分之一，则在高效液相色谱中,速率方程中的分子扩散项B/u较小，可忽略不计，即 H = A + C u 液体的黏度比气体大100倍，密度为气体的1000倍，故降低传质阻力是提高柱效主要途径。 载体粒度较大时的LC曲线。 由速率方程，降低固定相粒度可提高柱效。 液相色谱中，不可能通过增加柱温来改善传质。分离过程需要保持恒温。 改变淋洗液组成、极性是改善分离的最直接的因素。 上图为粒度较大时的LC曲线 左图为粒度较小时的LC曲线 流速是调整分离度和出峰时间的重要可选择参数。 3.固定相及分离柱 气相色谱中的固定液原则上都可以用于液相色谱，其选用原则与气相色谱一样。但在高效液相色谱中，分离柱的制备是一项技术要求非常高的工作，一般很少自行制备。 选择流动相时应注意以下几个普遍性的问题： （1）尽量使用高纯度试剂作流动相，防止微量杂质长期累积损坏色谱柱和使检测器噪声增加。 （2）避免流动相与固定相发生作用而使柱效下降或损坏柱子。如使固定液溶解流失；酸性溶剂破坏氧化铝固定相等。 （3）试样在流动相中应有适宜的溶解度，防止产生沉淀并在柱中沉积。 （4）选择的流动相应满足检测器的要求。如当使用紫外检测器时，流动相不应有紫外吸收。 在选择流动相时，溶剂的极性是选择的重要依据。常用溶剂的极性大小顺序为： 水(最大) 甲酰胺 乙腈 甲醇 乙醇 丙醇 丙酮 二氧六环 四氢呋喃 甲乙酮 正丁醇 乙酸乙酯 乙醚 异丙醚 二氯甲烷氯仿溴乙烷苯四氯化碳二硫化碳环己烷己烷煤油(最小) 当纯溶剂不能满足分离要求时，多采用混合溶剂或梯度洗脱。 式中?i 为混合溶剂中各溶剂的体积百分数。 二元混合溶剂的则为 式中?A， ?B分别为二元混合溶剂中溶剂A和溶剂B的体积百分数。 色谱分析需要调节流动相极性使试样组分的容量因子k的数值在适宜范围内。 对于正相色谱，二元溶剂的极性参数P 和组分的k值存在如下关系： 式中、分别为初始和调节后二元溶剂的极性参数。k1、k2为组分相应的容量因子。 例4-3 在一反相色谱柱上，当流动相为30%甲醇和70%水(体积比)时，某组分的保留时间为25.6min，死时间为0.35min，如何调节溶剂配比使组分容量因子为5？ 解：初始值 ? = 0.75 即调整溶剂比例为75%甲醇和25%水可使该组分的k值为5。 溶剂和样品分子间的作用力用接受质子的能力xe、给予质子的能力xd和静电力xn(由偶极矩决定)三种参数来表征，并以xe、xd和xn构成一个三角坐标图 。 溶剂可分为八组而分别位于图中不同区。I组的xe值较大，属质子受体溶剂；VII组的xd值较大，属质子给于体溶剂；V组的xn值较大，属偶极作用力溶剂。同组溶剂在分离中具有相似的选择性，不同组差别较大。 4.6.1 HPLC的应用 1. 环境中有机氯农药残留量分析 可对水果、蔬菜中的农药残留量进行分析。 固定相：薄壳型硅胶(37 ～50?m) 流动相：正己烷 流 速：1.5 mL/min 色谱柱：50cm?2.5mm(内径) 检测器：示差折光检测器 稠环芳烃多为致癌物质。 固定相：十八烷基硅烷化键合相 流动相：20%甲醇-水 ～100%甲醇 线性梯度淋洗，2%/min 流 速：1mL/min 柱 温：50 oC 柱 压：70 ?10