选修3教案26272829.docVIP

总第26、27 节 课题 DNA重组技术的基本工具 教学目标 知识目标 １、简述基础理论研究和技术进步催生了基因工程 ２、简述基因工程的原理和技术 能力目标 运用所学的DNA重组技术的知识，模拟制作重组DNA模型 运用基因工程的原理，提出解决某一实际问题的方案 情感目标 关注基因工程的发展 教学媒体 多媒体课件：展示基因工程的操作步骤 教学重点 DNA重组技术所需要3种基本工具的作用 教学难点 基因工程载体需要具备的条件 教学过程 DNA基因重组技术工具 切割DNA的工具，“分子手术刀”──限制酶；DNA片段的连接工具，“分子缝合针”──DNA连接酶；基因转移工具，“分子运输车”──基因进入受体细胞的载体。下面我们就来学习这方面的内容。 在进入对限制酶的学习时，你们可能最关心的是这种工具酶到哪里去寻找。一些生物的DNA可能进入另一种生物的细胞中。这种可能可用什么实例来说明？ 噬菌体侵染细菌的实验。 现今存在的生物为什么没有在长期的进化过程中被外源DNA的入侵而绝灭，仍能保持一种稳定状态呢？ 生物体有的有免疫系统，如动物；有的有保护作用的组织、器官，如植物。 那么作为单细胞的生物来讲，怎么会有那么复杂的结构和系统？它如何来抵抗入侵的外源DNA，保护自身呢？ 只有让外来的DNA失效，才能保护自身。 那么怎样才能让DNA失效？DNA酶用DNA酶，那么生物自身的DNA不也要失效了吗？ 一种特殊的酶，能切割外来的DNA，而对自身不切割。 获得这种酶的意向？：到单细胞的生物中去找。单细胞生物比多细胞生物更容易受到外源DNA的侵入。在长期的进化过程中，使其必须有处理外源DNA的酶。科学家们经过不懈的努力，终于从原核生物中分离纯化出这种酶，叫做限制酶。迄今已从近300种微生物中分离出4 000种限制酶。这种酶与我们以前知道的DNA酶的作用是不同的。看书，学习限制酶特有的作用。 特殊的酶有什么作用？它们能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。 以上这句话，说出了两层意思。一是识别特定核苷酸序列。看图，EcoRI只能识别GAATTC的核苷酸序列，SmaI只识别CCCGGG的核苷酸序列。第二层意思是从特定部位的两个核苷酸之间切开。看图，EcoRI就从G和A之间切开，SmaI就从C和G之间切开。 刚才我们提到科学家们已经分离出4 000多种限制酶。由于酶的不同，它们识别的特定核苷酸序列也不同，这样就为我们切割DNA提供了多种特定的“手术刀”。但它们切割DNA后形成的末端有两种可能。 一种形成黏性末端，一种形成平末端。 限制酶在它识别序列的中心位置两侧将DNA两条单链分割开，就形成黏性末端，而从识别序列的中心位置切开就产生平末端。 切断的DNA片段要与受体细胞的DNA连接，能用什么酶吗？ 用DNA复制中的DNA聚合酶 DNA连接酶是将双链的DNA片段连接起来，而DNA聚合酶则是将一个个脱氧核苷酸连接起来。DNA连接酶是将双链的DNA片段连接起来，就是说DNA连接酶是同时连接双链的切口，而DNA聚合酶只是在单链上将一个个脱氧核苷酸连接起来。相同之处都是通过形成磷酸二酯键来连接的。 限制酶切割后有两种不同的结果，一种产生黏性末端，一种产生平末端。那么恢复它们的连接，E·coli DNA连接酶只能将双链DNA片段黏性末端之间连接起来，不能将双链DNA片段平末端之间连接起来。 T4 DNA连接酶既可“缝合”双链黏性末端， 也可“缝合”双链DNA的平末端， 但平末端之间连接的效率比较低。 单纯的DNA片段是很难导入受体细胞的，所以我们将切割下来的目的基因导入受体细胞就需要有一个“分子运输车”帮助。不是任何的“分子运输车”都可以用来作目的基因进入受体细胞的载体的。其中的理由要从实际情况出发考虑才能清楚。 1.假如目的基因导入受体细胞后不能复制将怎样？ 2.作为载体没有切割位点将怎样？ 3.目的基因是否进入受体细胞，你如何去察觉？ 4.如果载体对受体细胞有害将怎样？不能分离会怎样？ 1.导入受体细胞的目的基因不能复制，将在细胞增殖中丢失。 2.载体没有切割位点，外源的目的基因不可能插入。 3.如果载体上有遗传标记基因，这样，在载体进入受体细胞后，就可通过标记基因的表达来检测。 4.载体对受体有害，将影响受体细胞新陈代谢，进而使转入的目的基因也无立足之地。载体不能分离，就不能获得更多带有目的基因的载体。 1. 能自我复制； 2. 有切割位点； 3. 有遗传标记基因； 4. 对受体细胞无害、易分离。 通常利用的载体是“质粒”。质粒寄宿在细菌细胞内的小型的环状DNA。 找到“复制原点”──说明质粒能复制并能带着插入的目的基因一起复制。找到“目的基因的插入位点”──说明质粒有切割位点。 找到“氨苄青霉素抗