§2.3动物的克隆.ppt

（一）动物的细胞和组织培养 看书思考: 2、能否用植物组织培养的方法使动物细胞发育成 动物个体？ 3、动物的细胞和组织培养的理论依据（原理）？ 细胞增殖 1、动物细胞、组织培养关系 一、动物细胞培养和克隆形成 （二）动物组织培养技术的发展 真正开始 1885年鸡神经板在生理盐水中培养成活组织培养一词诞生 1903年 皮肤及白细胞培养于腹水和血清中，结果细胞的成活期达1个月，并且看到细胞分裂 1907美国科学家将一部分蛙胚神经管培养在蛙淋巴液中，成功看到了神经纤维末端的阿米巴运动，解决了神经纤维起源问题，并创立了悬浮培养法 萌芽 1951通过对黑人妇女的宫颈癌组织的体外连续培养，获得肿瘤细胞系即不死细胞系-海拉细胞系 1912年鸡胚细胞的培养1943科学家在致癌物20-甲基胆蒽的诱导下培养小鼠结缔组织，获得了能在小鼠体内生长肉瘤的L-细胞系 组织培养工作进入了全新阶段 材料动物有何特点，为什么？ （三）动物细胞培养过程 一般为幼龄动物或胚胎,因为这些组织或器官上的细胞生命力旺盛，分裂能力强 用胰蛋白酶处理目的？ 消化组织中的胶原纤维和细胞外的其他成分，获得单个的成纤维细胞悬浮液。 思考动物培养条件？特殊培养液？ 此处细胞在该生活环境中能无限生长和增殖吗？ 无菌、无毒环境 适宜的温度—人和哺乳动物细胞最适温度为35 －37℃。 气体和适宜的酸碱度—需要一定量的O2等、 pH7.2-7.4 适宜的渗透压 营养物质—— 动物细胞培养条件： 主要有：葡萄糖、氨基酸、无机盐、 维生素和动物血清等 保证细胞顺利的生长增殖 细胞贴壁 贴壁生长：细胞培养时，悬液中分散的细胞很快就贴附在 瓶壁上。 要求：培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒、易于贴附。 （2）细胞贴壁生长和细胞的接触抑制： 接触抑制：当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞 就会停止分裂增殖的现象。 解释1：需要定期转移、分装培养原因？ 原代培养： 传代培养： 从机体取出后立即进行的细胞、组织培养，到培养的细胞形成生长晕并增大为止。 将原代培养细胞分成若干份，接种到若干份培养基中，使其继续生长、增值。 即：细胞从一个培养瓶转移或移植到另一个培养瓶为传代培养。 解释2：细胞培养 （1）细胞密度过大和代谢消耗引起营养枯竭。 细胞悬浮液 单个细胞 加特殊培养液 原代培养 细胞形成生长晕并增大 传代培养 细胞系或细胞株 ㈢动物细胞培养过程 动物的组织、器官 胰蛋白酶 （分解弹性纤维） 如：动物血清等 ①细胞密度过大、代谢消耗引起营养枯竭 ②细胞贴壁生长和细胞的接触抑制 （四）细胞系和细胞株 （2）连续细胞系: （1）有限细胞系： （2）连续细胞株 （1）有限细胞株 2.细胞株： 可连续传代的细胞 不能连续培养下去的细胞系。如：二倍体细胞 能连续培养下去的细胞系 通过一定的选择或纯化方法，从原代培养或细胞系中获得的具有特殊性质的细胞 1.细胞系： 大多数具有异倍体核型 有的是恶性细胞系，具有异体致瘤性; 有的获得不死性（保留接触抑制，不致癌） 细胞系泛指可传代的细胞；细胞株是具有特殊性质的细胞系 3.细胞系与细胞株的关系 思考：植物组织培养和动物细胞培养的比较 比较项目 植物组织培养 动物细胞培养 原理 培养基性质 培养基特有成分 培养结果 培养目的 细胞的全能性 细胞增殖 固体培养基 液体培养基 蔗糖 植物激素 葡萄糖 动物血清 植物体 细胞株、细胞系 培育植株等 获得细胞或细胞分泌蛋白 （五）克隆培养法 1、定义： 未经克隆的异质性细胞系 纯系 克隆 2、产物: 遗传性状均一、表现的性状相似 3、细胞克隆的基本要求: 来源于单个细胞 4、克隆对象的选择 5、提高细胞克隆形成率的措施 6、细胞克隆的用途 选择对培养环境具有较大适应范围和具有较强独立生存能力的细胞。 单细胞不如群体细胞 原代培养细胞和有限细胞系不如无限细胞系、转化细胞系和肿瘤细胞 用自然或人工方法,使两个或多个不同的细胞或不同基因型融合成一个细胞的过程。 二、动物的细胞融合技术及其应用 （1）定义 病毒颗粒黏 附细胞表面 细胞膜连接 细胞膜被 病毒颗粒穿通 细胞融合、形成杂种细胞 （2）诱导融合的因素 生物法：灭活的仙台病毒诱导融合 化学法：聚乙二醇诱导融合 物理法：电激、激光诱导融合 1.动物细胞融合 （3）植物体细胞融合和动物细胞融合的比较 比较项目 植物体细胞融合 动物细胞融合 细胞融合原理 细胞融合的方法 诱导方法 用途 细胞膜的流动性 细胞膜的流动性 去除细胞壁后诱导原生质体融合 使细胞分散后诱导细胞融合 电刺激 化学（聚乙二醇） 电融合、PEG、 灭活的仙台病毒 获得杂种植株 制备单克