2.、DNA复制.ppt

参与真核细胞DNA复制的主要蛋白质和酶的结构与功能（续） 蛋白质名称 大小（kDa） 功能 复制因子C （RFC） 140, 40, 38, 37, 36 装载PCNA到DNA，依赖于DNA的 ATP酶活性（受到PCNA的刺激），与引物的3′-端结合，结合需要 ATP。参与聚合酶的切换：打破RPA和DNA聚合酶α/引发酶的接触，从而使聚合酶δ与 PCNA相连。 分裂细胞核抗原（PCNA） 36 提高聚合酶δ和聚合酶ε进行性，形成三聚体的环形结构（类似于大肠杆菌DNA 聚合酶III的β亚基），也可以和 RFC、FEN-1、核苷酸切除修复蛋白XPG以及其它一些蛋白质结合。 拓扑异构酶I 110 释放复制叉前面的超螺旋张力。 拓扑异构酶 IIa或IIb 170 (IIa), 180 (IIb) 分开连环体。 翼式内切核酸酶（FEN-1） 43 5′→3′外切酶/内切酶，切除冈崎片段5′-端的RNA引物，但不能水解与单链DNA相杂交的5′-三磷酸核苷酸（需要RNaseH1切掉5′-端的一段核苷酸），与PCNA的结合可刺激它的活性到10倍。FEN-1还能去除由DNA聚合酶α/引发酶合成的错配核苷酸。 RNaseH1 89 内切核酸酶，切断引物在5′-端留下单核糖核苷酸。 DNA连接酶I 125 连接冈崎片段，结合PCNA。使用ATP为能源。 SV40的 DNA复制模型 线形DNA末端复制问题的解决 （1）使用端聚酶； （2）将线形DNA暂时转变为环形DNA； （3）经重组形成串联体； （4）滚环复制； （5）使用蛋白质-dNTP作为引物。 T7噬菌体DNA末端DNA的复制 DNA复制的高度忠实性 （1）四种dNTPs浓度的平衡 （2）DNA聚合酶的高度选择性 （3）DNA聚合酶的自我校对 （4）错配修复 （5）使用RNA作为引物（？） 因为DNA合成刚开始的时候难以与模板链形成稳定的双螺旋，容易发生错配，用RNA做引物则可以降解之~~ 绝 句南京大学 生化系 杨荣武 复错不要紧， 只要校对真， 错了我一个， 还有后来酶。 干细胞分裂过程中的“不朽链假说” 干细胞的分裂是不对称的，而分裂的不对称性使以后的干细胞能够选择性得到含有最老的DNA模板的染色体。这样的假设是合乎逻辑的，因为如果一个干细胞在分裂中抓住最老的DNA，就等于将复制可能产生的错误“拒之门外”，从而大大降低了细胞癌变的可能性，而将来分化成体细胞的子细胞得到易错的新DNA也没有什么危险，因为它们很快停止分裂或者死亡，特别是在高度更新的组织。 “不朽链假说”图解 DNA复制的调节机制 DNA复制的调控主要集中在起始阶段， 原核细胞DNA复制起始的调控 在大肠杆菌，由Dam甲基化酶和DnaA蛋白控制。 真核细胞DNA复制起始的调控 （1）由执照因子控制的正调控 （2）由增殖蛋白控制的负调控 甲基化对原核细胞DNA复制的调节 酵母细胞DNA复制的正调控 * 9 * 9 * 9 * 7 * 9 * 9 DNA拓扑异构酶的催化的转酯反应 II型DNA拓扑异构酶的作用机制 5. DNA引发酶 是一种专门用来起动或引发DNA合成的酶。由于DNA聚合酶本身不能起动多聚物的合成，只能延伸已经被起动的多聚物，因此，引发酶是DNA复制所必需的。因为DNA复制的半不连续性，所以， 引发酶在前导链上只需用引发一次，而在后随链上则需用引发多次。 大肠杆菌引发酶的结构模型 6. 切除引物的酶 RNA引物只是用来起动DNA的复制，它最终并不存在于被复制的DNA分子之中，迟早要被除去，实际上，细胞内有专门的酶负责切除RNA引物。原核细胞内切除RNA的酶是DNA聚合酶I或核糖核酸酶H。真核细胞负责切除RNA引物的酶是RNase HⅠ/FEN1或FEN1/Dna2。 7. DNA连接酶 是一类催化一个双螺旋DNA内相邻核苷酸3′-羟基和5′-磷酸甚至两个双螺旋DNA两端的3′-羟基和5′-磷酸发生连接反应形成3′,5′-磷酸二酯键的酶。 DNA连接酶在DNA复制过程中的作用是“缝合”后随链上相邻的冈崎片段，使不连续合成的后随链成为一条连续的链。 DNA连接酶在催化连接反应时需消耗能量。根据能量供体的性质，连接酶可以分为两类：第一类使用 NAD+，第二类使用ATP。细菌的DNA连接酶属于第一类，真核细胞、病毒和噬菌体的连接酶属于第二类。 DNA连接酶的作用机理 8. 尿嘧啶-DNA糖苷酶 尿嘧啶-DNA糖苷酶是一种专门用来切除出现在DNA链上非正常尿嘧啶碱基的水解酶。 尿嘧啶出现在DNA链上有两种原因： 一是在DNA复制过程中，细胞中存在的dUTP代替dTTP直接进入新合成的DNA链； 二是DNA分子中的胞嘧啶碱基发生自发脱氨基作用。 9. 端聚