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8 基因组文库的构建与目的基因的获得 8.1 真核基因组DNA文库的构建 8.2 cDNA文库的构建 8.3 目的基因的获得 8.1 真核基因组DNA文库的构建 主要步骤： 载体的制备； 基因组DNA的分离； 插入片段的制备； 插入片段与载体的连接； 转化宿主菌； 基因组文库的生成。 用于构建基因组文库的载体 λ噬菌体基因组文库的构建 黏粒基因组文库的构建 YAC基因组文库的构建 BAC基因组文库的构建 基因组文库的大小和代表性 8.2 cDNA文库的构建 接头克隆 引物－转接头克隆 同聚尾克隆 Okayama-Berg载体克隆 cDNA的合成和处理 第一链的合成 反转录：以oligo（dT）为模板由反转录酶合成。 第二链的合成 自身引导合成法 置换合成法 PCR合成法 第二链的处理 同聚物加尾 接头法 精简cDNA文库的构建 SSH:抑制消减杂交Suppression subtractive hybridization EST：expressed sequence tag 在人类基因组测序工作中，有一个区别于“全基因组战略”的“cDNA战略”，即只测定转录的DNA序列。 从cDNA文库中获取一些长为300－400各碱基序列作为表达序列标签，其作用