第八章基因工程要点.pptVIP

Ti质粒及其衍生载体 Ti质粒包括五个区域： LB与RB之间的T-DNA，这段序列整合到植物基因组中； 质粒转移区(PT)； 3. 冠瘿碱代谢区； 4. 复制原点； 5. 毒性区(Vir)。 →T-DNA区域内的所有基因与转移无关，所以将致瘤基因全部缺失即卸甲(disarmed)后，将细菌抗生素的抗性基因或其它序列插入到这个区域，形成的T-DNA仍可将RB至LB内的序列转移并整合到植物基因组。 →Vir区的毒性基因是T-DNA转移所必需的，毒性基因可以顺式及反式两种方式控制T-DNA转移。 Ti质粒是约150-200kb的环状DNA分子，很难直接使用，故需对其加以改造，构建出Ti质粒的衍生载体系统，广泛用作植物基因工程中的载体： （1）双元载体(binary vectors） 如pBin19载体，具有原核生物的卡那霉素抗性基因(AphⅠ)作为细菌选择标记，真核生物的卡那霉素抗性基因(nos-NptⅡ)作为植物的选择标记，pUC19的多克隆位点及α-互补显色标记 （2）共整合载体(integrated vectors) 图12-15 棉花转基因植株生产过程 F 1. 共培养 2. 在选择培养基上筛选 3. 筛选获得的抗性愈伤 5. 胚萌发成苗 6. 转基因植株移栽大田 4. 抗性愈伤分化成胚状体 2、基因枪法 基因枪法\生物弹法\微粒枪法\微粒轰击法—金、钨 依