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单克隆抗体在水产养殖中的应用 摘要目前，单克隆抗体用于研究鱼类免疫学和鱼类传染病。单克隆抗体可用于从鱼免疫球蛋白类中分离单一的免疫球蛋白,确定鱼免疫球蛋白重链和轻链的变异体,研究B淋巴细胞的个体发生,提高鱼的免疫球蛋白和特定抗体的测量技术。从一些抗白细胞表面抗原中获得单克隆抗体并用于对不同子集的鱼类白细胞作为标记:中性粒细胞,非特异性细胞毒性细胞和负责混合型白细胞反应的细胞，通过使用单克隆抗体，许多识别鱼类病原体免疫测定反应的敏感性和特异性得到了提高。目前，通过将单克隆抗体和PCR结合使用，这些免疫测定试图进一步得到改善。随着这些实际和技术的应用，鱼类疾病的流行病学的研究开始涌现。在不久的将来,这些新方法将会在成鱼载体和受精卵中检测到低分子量的病原体,从而有助于防止鱼类疾病的传播。鱼病原体的单克隆抗体被用于被动免疫的研究以及构象探针在基因工程疫苗的开发。 关键词单克隆抗体水产养殖免疫球蛋白白细胞标记诊断疫苗 前言 1975年，Kohler and Milstein第一次报道了将B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合产生杂交瘤使得生产几乎无限数量的单一特异性的抗体成为可能。这些单克隆抗体的可用性在基础研究领域(如免疫学微生物学和细胞生物学)已经产生很大的影响并发现在人类和兽医药学中许多不同的应用。 虽然人类在水产养殖业中的消费还包括软体动物和甲壳类动物但是单克隆抗体在水产养殖中大多数应用于硬骨鱼类。人工养殖的硬骨鱼像虹鳟鱼、鲑鱼、鲤鱼、鲶鱼和一些海洋物种像大比目鱼的单克隆抗体已经非常广泛使用。本综述的重点主要是单克隆抗体应用的两个方面一是宿主的体液和细胞免疫反应另一个是描述病原体(病毒、细菌或寄生虫)诊断技术的改进或抗原决定簇的识别的抵御是为了决定潜在的重组疫苗的发展。 鱼类白细胞标记 面临的问题和困难 最有效的识别和分离lymphohemopoietic系统脊椎动物的不同细胞株系细胞表面糖蛋白的一种分析方法。细胞表达的特定的或单一表面抗原的根据是细胞株系的分化或激活阶段。因为细胞杂交技术的出现大量收集单克隆抗体的发展依靠人类、小鼠及农业方面的物种如牛、猪、羊、马、鸡的白细胞。这些都是在正常和病变的研究中非常有用的条件。 直到单克隆抗体技术的引入研究的主要问题是细胞表面分子会产生一个特定的细胞表面分子Ab抵抗独特的细胞表面分子。因为所有细胞表面分子都可能是潜在的抗原,除非使用纯的抗原,异种的免疫将多克隆抗血清其中包含许多不同的混合物Abs具有单一特异性以及共享抗原特异性与随之而来的缺乏特异性(与存在于不同类型的细胞中的常见抗原的交叉性反应)。即使在这种情况下使用纯抗原将会导致Abs混合物的不同定量(也可以共享相关蛋白)和不同亲和力。几种方法一直在试图减少多克隆抗血清不必要的交叉性反应如吸收其他细胞系的抗原。然而水产养殖中的单克隆抗体还没有一般的解决方案例如，交叉反应是鱼的胸腺淋巴细胞和血清免疫球蛋白（Ig）结合，而Ig应和多克隆抗血清结合。直到有足够证据，这些结果才被解释为在某几种鱼中存在sIg+类型胸腺细胞。这表明它是由多克隆抗血清与各种非Ig分子的碳水化合物部分交叉反应引起的假象。分析抗Ig单克隆抗体得出鱼胸腺中含量少，如果有的话，就是B细胞。 使用方法 一些研究表明，如高等脊椎动物一般，鱼的淋巴细胞也存在异质性。就此方面，根据表面免疫球蛋白（sIg）亚群B细胞和T细胞（和空细胞）在“体外”试验各自的功能活性表达，鱼的淋巴细胞可以分开。例：a)哺乳动物B和T细胞促分裂原的增殖反应，如LPS或ConA(De Luca et al., 1983；Sizemore et al., 1984)，b) 抗体与胸腺依赖性和非胸腺依赖性抗原反应(Miller et al., 1985; Miller et aL, 1987)，c) 混合淋巴细胞反应(Miller et al., 1986)。然而，哺乳动物和鸟已研究出的大量单克隆抗体与他们的白细胞相比，单克隆抗体识别鱼的白细胞特异性膜标记物的数量仍然稀少。但识别免疫球蛋白承载淋巴细胞（B细胞）是可以的。因此，已经报道了数种硬骨鱼的血清免疫球蛋白单克隆抗体(如表1)。到目前为止，只有少数报道是单克隆抗体识别Ig阴性亚群的，其中提及鱼的T淋巴细胞标志物是稀少的。 因为胸腺被认为是T细胞前体成熟的器官，胸腺细胞已被用作针对T细胞标志物的单克隆抗体培养的免疫原。第一个在鱼类上应用这种策略的是Secombes et al. (1983)，他研究出鲤鱼胸腺细胞的单克隆抗体。然而，获得的大多数单克隆抗体与鲤鱼Ig酶联免疫结合呈阳性。WCT23是一种单克隆抗体，进一步被Van Diepen et al.表征（1991）。WCT23被鲤鱼鱼头中大量淋巴细胞和所有颗粒白细胞染色，但不与红细胞反应。通过Western