微生物的生长及其控制课件.ppt

第六章 微生物的生长及其控制 通过本章的学习，要求掌握： 1、微生物生长的研究方法； 2、细菌纯培养生长曲线各个时期的主要特点； 3、物理因子，化学药物对微生物生长的影响； 4、微生物生长的控制。 重点： 细菌纯培养生长曲线，微生物生长的控制。 难点： 如何利用细菌纯培养生长曲线的对数生长期来计算细菌的代时和代数。 第一节 微生物生长的研究方法 生长: 微生物在适宜的环境条件下，不断地吸收营养物质，并按照自己的代谢方式进行代谢活动，如果同化作用大于异化作用，则细胞质的量不断增加，体积得以加大，于是表现为生长。简单地说，生长growth就是有机体的细胞组分与结构在量方面的增加。 繁殖: 单细胞微生物如细菌，生长往往伴随着细胞数目的增加。当细胞增长到一定程度时，就以二分分裂方式形成两个基本相同的子细胞。这种由于细胞分裂而引起的个体数目的增加，称为繁殖reproduction。 在多细胞微生物中，如某些霉菌，细胞数目的增加（菌丝细胞的不断延长或分裂）如不伴随着个体数目的增加，只能叫生长。只有通过形成无性孢子或有性孢子使得个体数目增加的过程才叫做繁殖。 发育:在一般情况下，当环境条件适合，生长与繁殖始终是交替进行的。从生长到繁殖是一个由量变到质变的过程，这个过程就是发育development。 如果某一或某些环境条件发生改变，并超出了生物可以适应的范围时，就会对机体产生抑制乃至杀灭作用。 一、纯培养技术 微生物在自然界总是混杂地生活在一起，要想研究某一种微生物，必须把研究对象从混杂群体中分离出来。微生物学中将在实验室条件下由一个细胞或一种细胞群繁殖的后代称为纯培养pure culture。 获得纯培养的方法: 1、稀释倒平板法 2、稀释涂布法 3、划线分离法 streak plate method 平行划线 连续划线 此法主要用于杂菌不多的标本。 分区划线 本法适用于杂菌量较多的标本。获得单个菌落。 4、显微操作仪直接挑取单个细胞（适于原生动物、单细胞藻类等） 5、稀释摇管法 （分离厌氧菌） 6、液体培养基稀释分离 7、选择性培养基分离 根据所要分离的菌种的特性选用培养基，如： ①分离真菌用马丁氏培养基，pH偏酸；分离放线菌用高氏1号培养基，pH中性偏碱。 ②不同微生物对化学试剂的敏感性不同：从土壤中分离细菌在培养基中加制霉菌素抑制真菌生长；从土壤中分离真菌时，在培养基中加孟加拉红和链霉素抑制细菌生长。 ③根据分离对象的营养特征分离特殊微生物：分离纤维素分解菌时，培养基以纤维素为唯一碳源。分离固氮菌，用无氮培养基，以N2作氮源。 二、微生物生长量的测定 1．测定总菌数（即总的细胞数量）： ⑴ 计数板直接测数 ⑵ 染色涂片计数法 ⑶ 比浊法 2. 测定活菌数： （1）稀释平板测数法 （2）稀释培养测数法 （3）薄膜过滤计数法 3.测定细胞生物量： （1）测定细胞干重 （2）测定总氮量 （3）测定DNA含量 (4) 测定ATP含量 (5）测定代谢活性 染色涂片计数法 取0.01ml的菌悬液放在1cm2 的玻片上，让其干燥，然后固定染色，再置显微镜下计数每一视野中的菌数，算出视野面积，按下列公式即可求出每ml原菌液中的含菌数。 每ml菌液中的含菌数=视野中的平均菌数×1cm2/视野面积×100 比浊法 比浊法的原理是利用细菌细胞在溶液中数量越多，浊度越大，在光电比色计中测定时所吸收的光线越多（即透过的光线少） 方法是先要测定出一条标准曲线，即将菌液制成不同浊度的稀释液，将此不同浊度的稀释液用光电比色计测出其消光值，再把这各种浊度的稀释液用显微镜直接计数法测出其中的含菌数，以不同浊度的稀释液的消光值作纵坐标，以不同浊度稀释液所含的菌数作横坐标，绘出标准曲线。有了标准曲线，就可以取未知菌液测消光值后通过查此曲线得知未知菌液中的含菌数。此方法在工业发酵中应用较多，因为它快速，节约时间。 稀释培养测数法（又称最大概率法，MPN most probable number） 例如：某细菌在稀释培养法中生长情况如下： 稀释度: 10—3 10—4 10—5 10—6 10—7 10—8 重复数: 5 5 5 5 5 5 有菌生 长管数： 5 5 5 4 1 0