吉林大学食品生物化学 5 酶.pptVIP

1. “锁与钥匙”学说： 1894年E.Fischer 提出：S分子或其一部分像钥匙一样楔入E活性中心部位。 此学说强调E与S结构互相吻合(刚性模板)。 一．酶活力的测定： 1．酶活力（活性）： 2．酶的活力单位： 定义： 国际单位（IU）（1961年）： 在最适反应条件（25℃）下，每分钟内催化 1μmol底物转化为产物所需的酶量定为一个酶活力单位，即1 IU = 1μmol / min。 Katal（Kat）单位： 在最适条件下，每秒钟能催化1mol底物转化为产物所需的酶量为1 Kat单位（1Kat = 1mol / S）。 1Kat= 60×106 IU， 1IU = 16.7 nKat。 3．酶的比活力： 每mg蛋白质所含的酶活力。表示酶的纯度，也表示单位质量蛋白质的催化能力。 比活力 = U / mg蛋白 = 总活力U / 总蛋白mg 4．酶活力的测定方法： （1）分光光度法： （2）荧光法： （3）同位素测定法： （4）电化学法： （3）kcat/Km的意义：在生理条件下，大多数酶并不被底物所饱和，在体内[S]/Km的比值通常介于0.01-1.0之间。 Vmax=kcat[ET] 当[S]Km时， [E]=[ET] v?(kcat/Km) · [E][S] kcat/Km= k1·k3/ (k2+k3) 上限为k1 kcat/Km表示酶的催化效率。 抑制程度的表示方法：一般用反应速率的变化来表示。不加抑制剂时的反应速率为v0，加入抑制剂后的反应速率为vi，则表示： （1）相对活力分数（残余活力分数）： a = vi / v0 （2）相对活力百分数（残余活力百分数）： a % = vi / v0 ×100% （3）抑制分数：指被抑制而失去活力的分数 i = 1—a = 1—vi / v0 （4）抑制百分数： i % = （1—a）×% = （1—vi / v0）×% 通常所谓抑制率是指抑制分数或抑制百分数。 ES的生成量 = ES的分解量 即： v1 =v23 k1[（E）-（ES）][S] = [ES] （k2? k3） [（E）-（ES）][S]/ [ES] = （k2? k3）/ k1 (3) 设 Km=(k2+k3)/k1 将(3)重排得 [ES] =[E][S]/ Km ? [S] (4) [S] [E] [E] =[ES], Vmax = K3[ES]= K3[E] （7） 将（7）式代入（6）式 v=k3[ES] （5） v=k3[E][S] / Km ? [S] （6） V = Vmax·[ S ] Km + [ S ] Km—米氏常数，当酶反应速率达到最大反应速率一半时的底物浓度，单位：mol/L； Km= (k2+k3)/k1 Km是酶的特征常数，近似表示酶与底物的亲和力。 （1）当[S]《Km时，反应速率与底物浓度成正比，v与[S]的关系符合一级动力学。酶没有全部被底物所饱和。 （2）当[S]》Km时，反应速率已达到最大速率，这时酶全部被底物所饱和，v与[S]无关，符合0级动力学，只有在此条件下才能正确测得酶活力。 （3）当[S]=Km时，反应速率为最大速率的一半，因此Km就代表反应速率达到最大反应速率一半时的底物浓度。 Km = [S] 2.动力学参数的意义 （1）米氏常数的意义： Km是酶的一个特性常数： Km可以判断酶的专一性和天然底物： 若已知某个酶的Km，就可计算出在某一底物浓度时的反应速率相当于Vmax的百分数。 Km可以帮助推断某一代谢反应的方向和途径： （2）Vmax和k3（kcat）的意义： 当[S]很大时，Vmax = k3[E]，说明Vmax与[E]成线性关系，而直线的斜率为k3，为一级反应速率常数。K3表示当酶被底物饱和时每秒钟每个酶分子转换底物的分子数，这个常数又叫做转换数（TN），通称为催化常数（kcat），kcat越大，表示酶的催化效率越高。 ES的生成量 = ES的分解量 即： v1 =v23 k1[（E）-（ES）][S] = [ES] （k2? k3） [（E）-（ES）][S]/ [ES] = （k2? k3）/ k1 (3) 设 Km=(k2+k3)/k1 将(3)重排得 [ES] =[E][S]/ Km ? [S] (4) [S] [E] [E] =[ES], Vmax = K3[ES]= K3[E]