植物体细胞杂交剖析.pptVIP

发展历程 70年代，技术建立和完善优化 1972年获得烟草种间体细胞杂种 1975年高Ca高pH加PEG融合方法，电融合法 大量成功报道，不少为异想天开的实验 80年代初，由模式植物转向农作物/经济作物，对称融合到非对称融合，创造新种质的技术手段 80年代末，大量木本植物细胞融合成功的报道 90年代至今，成为一种育种手段 植物体细胞杂交的几个重要进展 1960年，Kocking用酶法制备高等植物原生质体首次获得成功； 1971年，Takebe首次从离体烟草原生质体培养中获得再生完整植株； 1972年，Carlson首次获得粉蓝烟草和郎氏烟草的细胞杂种，这是第一个植物体细胞杂种； 1974年，Kao将聚乙二醇（PEG）诱导融合法应用于植物细胞融合并建立了相应的融合技术； 1978年，Melchers获得第一个属间体细胞杂种（番茄＋马铃薯）； 1981年，Zimmerman发明了电融合仪，并首次提出了电融合概念； 1987年，Schweiger建立了单对原生质体电融合技术程序。 根据概念，在理论上任何细胞都可能通过体细胞杂交而成为新的生物资源。这对于种质资源的开发和利用具有深远的意义。 融合过程不存在有性杂交过程中的种性隔离机制的限制，为远缘物种间的遗传物质交换提供了有效途径。 体细胞杂交产生的杂种细胞含有来自双亲的核外遗传系统，在杂种的分裂和增殖过程中双亲的叶绿体、线粒体DNA亦可发生重组，从而产生新的核外遗传系统。 体细胞杂交与有性杂交的异同 几种不同的表述： 体细胞杂交：Somatic hybridization 细胞融合：Cell fusion 原生质体融合：Protoplast fusion 无性杂交：asexual hybridization 超性杂交：Parasexual hybridization 超性融合：Parasexual fusion 细胞操作：Cell manipulation 细胞工程（Cell engineering） 体细胞杂交步骤： 1 原生质体的制备 2 原生质体的融合 3 杂种细胞选择 4 杂种细胞培养 5 由愈伤组织再生植株 6 杂种植株的鉴定 植物体细胞杂交技术的过程： 原生质体融合的有关名词 对称杂种（双亲给杂种贡献的遗传物质均为100%） 非对称杂种（双亲给杂种贡献的遗传物质不等（相对值） 胞质杂种（cytoplasmic hybrid, Cybrid）：细胞质重组，细胞核未重组 对称融合（symmetric fusion） 也称标准融合（Standard fusion） 非对称融合（asymmetric fusion）：融合前对一方进行处理，使其染色体丢失一部分 原生质体融合的有关名词-II 供-受体融合：Donor-recipient fusion 体配融合（gameto-somatic fusion）（性细胞与体细胞融合） 亚原生质体-原生质体融合： Subprotoplast-protoplast fusion 小原生质体：Miniprotoplast 微原生质体：Microprotoplast 胞质体：Cytoplast 胞质体-原生质体融合: Cytoplast-protoplast fusion 微原生质体融合 植物微原生质体融合是在此基础上发展起来的将一种植物的一条或几条染色体转移到另一种植物中的新的非对称原生质体融合的方法。 其原理是采用适当浓度的微核诱导剂，包含DNA合成抑制剂和纺锤体毒素两大类，常用的如秋水仙素(COL)、安磺灵(oryzalin)、草胺磷除草剂(eremart)、甲基氨草磷(ApM)、甲氨喋吟(MTx)、氯苯胺灵(CIPC)等。 这些药剂可使正在分裂的植物细胞停留在有丝分裂中期，数小时后，染色体解开螺旋，形成内含多个微原生质体的微核化细胞，每个微原生质体内含有一条或几条染色体，由于有丝分裂停留在中期，每条染色体的两个姐妹染色单体仍在一起，着丝点不分开。通过酶解去掉微核化细胞的细胞壁获得微核化原生质体，再用离心等技术分离出带有一条或几条染色体的微原生质体，诱导其与完整的受体原生质体融合，从而实现部分基因组的转移。 微原生质体融合主要包括3个步骤:微原生质体诱导、分离以及富集、微原生质体融合和植株再生。 微核是细胞的染色体发生断裂后,细胞进入下一次分裂时,染色体片段不能随有丝分裂进入子细胞,而在细胞浆中形成直径小于主核的,嗜色与主核一致,完全与主核分开的圆形或椭圆形微小核 ，位于细胞浆中独立于主核的核小体，其染色同主核，但比主核淡，其直径小于主核1/3，主要