第七章_外源化学物致突变作用.pptVIP

碱基化学结构改变 29 DNA链损伤 1 二聚体的形成 (dimer) 2 DNA加合物 (DNA adduct) 3 DNA-蛋白质交联物 (DNA-protein crosslinks, DPC) 30 DNA加合物 31 32 引起突变的细胞分裂过程改变 1??? 与微管蛋白二聚体结合 2 ?? 与微管上的巯基结合 3??? 已组装好微管的破坏 4??? 中心粒移动受阻 5??? 其他作用 其他改变 1 DNA高保真复制受损 2 DNA修复受损 33 化学毒物致突变作用的结果 34 （一）DNA损伤的修复 1 直接修复 光复活（photoactivation）光裂合酶 “适应性”反应 烷基转移酶 O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基化转移酶（MGMT） 机体对致突变作用影响 35 2 切除修复 a? 核苷酸切除修复(Nucleotide excision repair) b? 碱基切除修复(Base excision repair) ? 3 错配修复 (Mismatch repair) 4 双链断裂修复 5 交联修复 6 呼救性修复（SOS repair） 36 DNA 修复系统 DNA Repair systems 37 氧化代谢酶 细胞色素P-450是机体代谢化学毒物的主要酶类 酯酶 环氧水化酶（EH） 谷胱甘肽硫转移酶(GST) 体内重要的解毒酶系之一，许多疏水性及亲电子 物质通过GST与谷胱甘肽结合形成硫醚酸，经尿 排除体外。 （二）遗传因素对致突变作用的影响 ▲代谢酶遗传多态性 38 参与化学物代谢的主要酶类 人肝中I相和II相代谢酶 I 相酶 II 相酶 CYP1A1/2 CYP2A6 CYP2B6 CYP2C9 CYP2C19 CYP2D6 CYP2E1 CYP3A4/5 NADPH-醌氧化还原酶(CPR) 谷胱甘肽-S-转移酶 N-乙酰转移酶 UDP-葡糖醛酸转移酶 CYPs参与了90%以上的化合物代谢 39 O6-甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶（MGMT） 聚（二磷酸腺苷-核糖）多聚酶（PARP） 是另一类参与DNA断裂修复酶 其他 DNA错配修复酶 ▲修复功能的个体差异 40 ▲ 观察的遗传学终点 ? 基因突变 ② 染色体畸变 ③ 染色体组畸变 ④ DNA原始损伤 ⑤ 染色体分离改变 观察致突变作用基本方法 41 ▲ 成套的观察项目 ①? 体内、体外 ②? 体细胞、生殖细胞 ? 代谢活化 ? 突变机制差异 42 ◆成套项目选择原则 1. 同时反映基因突变、染色体畸变、染色 体分离异常及原发性DNA损伤等每一类型 的遗传学终点 2. 物种：动物、细胞；原核生物、真核细 胞；细菌、动物细胞、人体细胞 3. ? 体内、体外试验配合 4. 体细胞、生殖细胞 43 常用的致突变实验 微核实验(micronucleus test, MN) 微核与染色体损伤有关，是染色体或染色单体无 着丝点断片或纺锤丝受损伤而丢失的整个染色体 44 染色体畸变分析 (chromosome aberration analysis) 将观察细胞停留在细胞分裂中期相，用显微镜检查染色体畸变和染色体分离异常 45 单细胞凝胶电泳 (Comet assay) 碱性彗星试验可检测DNA链断裂、碱性不稳定 位点和不完全剪切修复位点的数量 46 致突变试验中的一些问题 阴性和阳性对照的设立 体外试验的活化系统 哺乳动物细胞：如大鼠肝原代细胞 S9：含混合功能氧化酶 纯化酶和基因工程 47 试验结果在毒理学安全性评价中的作用 质量控制： ①阴性和阳性对照 ②盲法原则 ③统计分析 ④结果重现性 48 阴性判定 ①最高剂量 包括受试物溶解度或灌胃量许可的最大剂量 ②组间差距 不应过大