【KS5u原创】2013届高三生物复习课件 生物技术在组织培养、DNA和蛋白质分离.pptVIP

4.实验操作流程  样品的处理  粗分离——透析(去除小分子杂质)　  纯化——凝胶色谱法进行分离和纯化　 纯度鉴定——SDS -聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定相对分子质量 提醒　①红细胞洗涤过程中，洗涤三次后，上清液仍有黄色，可增加洗涤次数，否则无法除去血浆蛋白；离心时转速要低，时间要短，否则白细胞等会一同沉淀，达不到分离效果。 ②血红蛋白释放过程中，蒸馏水的作用是使红细胞吸水涨破，甲苯的作用主要是溶解细胞膜。 ③为了加快干凝胶的膨胀，可将加入洗脱液的湿凝胶用沸水浴加热，逐渐升温至接近沸腾，通常只需1～2 h。这种方法不但节约时间，而且可以除去凝胶中可能带有的微生物，排除胶粒内的空气。 ④滴加样品时，吸管管口要贴着管壁环绕移动，防止破坏凝胶面。 4．(2011·广东卷，5)以下关于猪血红蛋白提纯的描述，不正确的是 (　　) A．洗涤红细胞时，使用生理盐水可防止红细胞破裂 B．猪成熟红细胞中缺少细胞器和细胞核，提纯时杂蛋白较少 C．血红蛋白的颜色可用于凝胶色谱法分离过程的监测 D．在凝胶色谱法分离过程中，血红蛋白比分子量较小的杂蛋白移动慢 对位训练 答案　D 解析 猪成熟红细胞中缺少细胞器和细胞核，提纯时杂蛋白较少，是提纯血红蛋白的理想材料。提纯血红蛋白分四步：红细胞的洗涤、血红蛋白的释放、分离血红蛋白溶液、透析，其中洗涤红细胞时，要用生理盐水反复洗涤，既要将红细胞洗涤干净，又要不破坏红细胞，然后再用蒸馏水和甲苯使红细胞破裂，释放出血红蛋白。分离提纯血红蛋白时用凝胶色谱法，其原理是根据相对分子质量的大小来分离蛋白质，相对分子质量大的蛋白质移动速率较快；血红蛋白的颜色可用于观察红色区带的移动情况，并据此判断分离效果。 排雷　(1)血红蛋白的提取和分离时红细胞分层不明显，可能是洗涤次数少、未能除去血浆蛋白的原因。此外，离心速率过高和时间过长，会使白细胞和淋巴细胞一同沉淀，也得不到纯净的红细胞，影响后续血红蛋白的提取纯度。 (2)凝胶的装填标准是紧密、均匀。检测凝胶色谱柱的装填是否成功可以在凝胶柱旁放一支与凝胶柱垂直的日光灯，检查凝胶是否装填得均匀。此外，还可以加入大分子的有色物质，观察色带移动的情况。如果色带均匀、狭窄、平整，说明凝胶色谱柱的性能良好。如果色谱柱出现纹路或是气泡，轻轻敲打柱体以消除气泡，消除不了时要重新装柱。 (3)G－75：“G”代表凝胶的交联程度，膨胀程度及分离范围，75表示凝胶得水值，即每克凝胶膨胀时吸水7.5 g。 (4)装填完后,立即用洗脱液洗脱的目的是使凝胶装填紧密。 (5)实验过程中加入柠檬酸钠的目的是防止血液凝固；低速、短时离心防止白细胞沉淀；缓慢搅拌防止红细胞破裂释放出血红蛋白。 (6)检测血红蛋白的分离是否成功的方法：如果凝胶色谱柱装填得很成功、分离操作也正确，能清楚地看到血红蛋白的红色区带均匀、狭窄、平整，随着洗脱液缓慢流出；如果红色区带歪曲、散乱、变宽，说明分离的效果不好，这与凝胶色谱柱的装填有关。 考点5　 生物技术实践应用——植物芳香油的提取 1．植物芳香油的基本知识 (1)成分：组成较复杂，主要包括萜类化合物及其衍生物。 (2)特点：具有很强的挥发性，易溶于有机溶剂。 (3)应用：玫瑰精油是制作高级香水的主要成分，能使人产生愉悦感；橘皮精油的主要成分是柠檬烯，具诱人的橘香味，是食品、化妆品和香水配料的优质原料。 2．玫瑰精油的提取流程与关键 (1)安装装置顺序：从左到右，自下而上。 (2)温度计位置：温度计水银球的上限与蒸馏烧瓶支管的下限处在同一水平线上。 (3)冷凝管中的水流向：从下方进水，上方出水，与蒸气流向相反。 (4)加热时防暴沸：垫石棉网，向液体中加入几粒沸石或碎瓷片。 (5)烧瓶内液体量：烧瓶容积的1/3～2/3。 (6)除水：加入无水Na2SO4后，放置时间可适当延长些。 (7)温度及时间：为提高产品质量，要严格控制蒸馏温度，可适当延长蒸馏时间。 3．橘皮精油的提取流程与关键 石灰水浸泡→漂洗→压榨→过滤→静置→再次过滤→橘皮油 (1)橘皮的处理：干燥后一定要用石灰水浸透，时间至少10 h以上。 (2)压榨液的处理：可以先用普通布袋过滤除去固体物和残渣，然后离心进一步除去质量较小的残留固体物，再用分液漏斗或吸管将上层的橘皮油分离出来。 5．(2010·课标全国卷，37)下列是与芳香油提取相关的问题，请回答： (1)玫瑰精油适合用水蒸气蒸馏法提取，其理由是玫