【优化方案】2016届高三生物一轮复习课件：第十二单元 现代生物科技专题 第41讲 基因工程及其安全性.pptVIP

1．图1表示含有目的基因D的DNA片段长度(bp即碱基对)和部分碱基序列，图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列。现有MspⅠ、BamHⅠ、MboⅠ、SmaⅠ4种限制性核酸内切酶，它们识别的碱基序列和酶切位点分别为C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG。 请回答下列问题： (1)图1的一条脱氧核苷酸链中相邻两个碱基之间依次由__________________________________连接。 (2)若用限制酶SmaⅠ完全切割图1中DNA片段，产生的末端是________末端，其产物长度为_________________________________________________。 (3)若图1中虚线方框内的碱基对被T—A碱基 对替换，那么基因D就突变为基因d。从杂合子中分离出图 1及其对应的DNA片段，用限制酶SmaⅠ完全切割，产物中共有________种不同长度的DNA片段。 脱氧核糖、磷酸、脱氧核糖 平 537 bp、790 bp、661 bp 4 (4)若将图2中质粒和目的基因D通过同种限制酶处理后进行连接，形成重组质粒，那么应选用的限制酶是__________。在导入重组质粒后，为了筛选出含重组质粒的大 肠杆菌，一般需要用添加__________的培养基进行培养。经检测，部分含有重组质粒的大肠杆菌菌株中目的基因D不能正确表达，其最可能的原因是_____________________________________________________ __________________________________________________。 BamHⅠ 抗生素B 同种限制酶切割形成的末端相同，部分目的基因D与质粒反向连接 解析：(1)一条脱氧核苷酸链中相邻的两个碱基之间是通过 “—脱氧核糖—磷酸—脱氧核糖—”相连的，要注意与两条 脱氧核苷酸链的相邻碱基之间通过氢键相连进行区分。(2)从 Sma Ⅰ的识别序列和切点可见，其切割后产生的是平末端， 图1中DNA片段有Sma Ⅰ的两个识别序列，故切割后产生的 产物长度为537(534＋3)bp、790(796－3－3)bp和661(658＋ 3)bp三种。(3)图示方框内发生碱基的替换后，形成的d基因 失去了1个SmaⅠ的识别序列，故D基因、d基因用SmaⅠ完 全切割后产物中除原有的3种长度的DNA片段外，还增加一 种(537＋790)bp的DNA片段。 (4)目的基因的两端都有BamHⅠ的识别序列，质 粒的启动子后抗生素A抗性基因上也有BamH Ⅰ的识别序 列，故应选用的限制酶是BamHⅠ，此时抗生素B抗性基因作为标记基因，故筛选时培养基中要添加抗生素B。若重组质粒 已导入了受体细胞却不能表达，很可能是因为用同种限制 酶切割后，目的基因和质粒有两种连接方式，导入受体细 胞的重组质粒是目的基因和质粒反向连接形成的。 考点二　基因工程的基本操作程序和应用 基因文库 PCR 较小 反转录酶 2．基因表达载体的构建 (1)基因表达载体的组成及作用： 目的基因 启动子 终止子 标记基因 (2)基因表达载体的构建过程： 同种限制酶切割 __________ DNA连接酶 3．将目的基因导入受体细胞： 生物 种类 植物 动物 微生物 常用 方法 农杆菌转化法 ______________ 感受态细胞法 受体 细胞 _____________ 受精卵 原核细胞 体细胞 显微注射技术 生物种类 植物 动物 微生物 转化过程 将目的基因插入到Ti质粒的_____________上→转入农杆菌→导入植物细胞→整合到受体细胞的_______________上→表达 将含有目的基因的表达载体提纯→取卵(受精卵) →___________→受精卵发育→获得具有新性状的动物 _________处理细胞→感受态细胞→重组表达载体DNA分子与感受态细胞混合→感受态细胞吸收__________ 分子 T-DNA 染色体DNA 显微注射 Ca2＋ DNA 4.目的基因的检测与鉴定： DNA分子杂交 分子杂交 抗原- 抗体杂交 深度思考 1．(2014·高考广东卷T25改编)下图为利用基因工程技术生产羧酸酯酶(CarE)制剂的流程 (1)过程①②分别需使用哪一类酶？ ? (2)过程③使用的感受态细胞可用哪种溶液制备？ ? (3)过程④欲鉴定目的基因是否导入受体细胞可利用什么方法？ ___________________________ 2．[2014·高考全国卷ⅡT40(4)]假如用得到的二倍体 转 基因耐旱植株自交，子代中耐旱与不耐旱植 株的数量比为3∶1时，则可推测该耐旱基因整合到了什么位置上？(答“同源染色体的一条上”或“同源染色体的两条上”)。 __________